膽固醇基-羧甲基可德蘭衍生物自聚集納米粒子的制備以及作為抗腫瘤藥物載體的研究.pdf

1、本研究利用內(nèi)源性小分子膽固醇疏水性修飾可德蘭衍生物--羧甲基可德蘭合成新型兩親性高分子聚合物并用以制備自聚集納米粒子，用抗腫瘤藥物表阿霉素為模型藥考察載體對(duì)小分子藥物的包埋及釋放行為；利用體外細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)考察載藥納米粒子的抗瘤效應(yīng)及細(xì)胞毒性，利用動(dòng)物實(shí)驗(yàn)考察載藥納米粒子在動(dòng)物體內(nèi)的藥代動(dòng)力學(xué)和不同組織的分布情況。主要研究?jī)?nèi)容及結(jié)果如下：
　　 采用化學(xué)的方法合成了一系列不同取代度的膽固醇基羧甲基可德蘭（CCMC），并用電位滴定、

2、紅外光譜（FT-IR）、氫核磁光譜（1H NMR）、X射線衍射（XRD）、差示掃描量熱儀（DSC）、高效液相儀（HPLC）對(duì)原料、中間產(chǎn)物以及產(chǎn)物的化學(xué)結(jié)構(gòu)及物理特征進(jìn)行了表征；用硫酸鐵氨比色法計(jì)算出系列CCMC的膽固醇取代度，取代度分別為2.3，3.5和6.4（％，每一百個(gè)羧甲基可德蘭糖單元）。采用透析加探頭超聲法在水中制備了CCMC自聚集納米粒子；并用透射電鏡（TEM）、動(dòng)態(tài)光散射儀（DLLS）、Zeta-電位儀和熒光光譜對(duì)CCMC

3、自聚集納米粒的形態(tài)、大小以及在水溶液中的性質(zhì)進(jìn)行了表征，結(jié)果表明，CCMC在水相中能形成規(guī)則球形的納米粒子，粒徑（144～233 nm）隨著膽固醇取代度的增加而減??；CCMC自聚集納米粒子的Zeta-電位在蒸餾水中為負(fù)值，說(shuō)明帶負(fù)電荷的羧甲基位于納米粒子的表面；CCMC材料的臨界聚集濃度（2.6×10-2～9.2×10-2mg/mL）與膽固醇的取代度有關(guān)，當(dāng)膽固醇取代度增大時(shí)其臨界聚集濃度減小。
　　 以抗腫瘤藥物表阿霉素為模型

4、藥物，采用硫酸銨梯度法制備了負(fù)載表阿霉素的CCMC自聚集納米粒子，結(jié)果表明，載藥量隨著藥物和載體材料比的增加而增加，包封率為78.0％～65.6％。透射電鏡（TEM）觀察顯示，載藥納米粒子為均勻的球形，表面較空白納米粒子粗糙；這可能是由于有一部分藥物吸附在納米粒子表面。動(dòng)態(tài)光散射（DLLS）結(jié)果表明載藥納米粒子的粒徑為294.4～510.4 nm，且隨著載藥量的增加而增加，表阿霉素在CCMC自聚集納米粒子中的釋放速率與釋放介質(zhì)的pH值和

5、載藥量相關(guān)，釋放速率隨釋放介質(zhì)pH值的升高而減慢，隨載藥量的增加而減慢。
　　 CCMC自聚集空白納米粒子、載藥CCMC納米粒子對(duì)HeLa細(xì)胞的體外細(xì)胞實(shí)驗(yàn)表明，當(dāng)空白納米粒子濃度高達(dá)100μg/mL時(shí)對(duì)HeLa細(xì)胞的生長(zhǎng)無(wú)抑制作用。當(dāng)載藥納米粒子或游離藥物中藥物濃度在0.01～10μg/mL范圍內(nèi)時(shí)有抑瘤作用；當(dāng)藥物濃度<1μg/mL時(shí)載藥納米粒子對(duì)HeLa細(xì)胞的抑制作用比游離藥物稍強(qiáng)；當(dāng)藥物濃度在1～10μg/mL時(shí)載藥納米

6、粒子對(duì)HeLa細(xì)胞的抑制作用比游離藥要明顯增強(qiáng)；同時(shí)，隨著藥物與細(xì)胞孵育時(shí)間的增加其對(duì)細(xì)胞的抑制作用也隨之增加。流式細(xì)胞儀及激光共聚焦顯微鏡研究結(jié)果表明，游離藥物主要分布于細(xì)胞核而載藥納米粒子分布在細(xì)胞核及細(xì)胞漿，同時(shí)HeLa細(xì)胞對(duì)載藥納米粒子的攝取明顯要高于對(duì)游離藥物的攝取。
　　 載藥CCMC納米粒子、游離藥物的Wister大鼠體內(nèi)藥代動(dòng)力學(xué)實(shí)驗(yàn)和組織分布實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，載藥CCMC納米粒子在大鼠體內(nèi)可達(dá)到長(zhǎng)循環(huán)和緩慢釋放的作

7、用，既能減少藥物的毒副作用，也能更好地延長(zhǎng)藥物作用時(shí)間；載藥CCMC納米粒子能顯著改變藥物在大鼠各臟器的分布情況，大大降低藥物對(duì)心臟的毒副作用，同時(shí)也避免了。腎小球的過(guò)濾作用。載藥CCMC自聚集納米粒子、游離藥物的抗腫瘤藥效學(xué)研究結(jié)果表明，載藥CCMC納米粒子能降低藥物的毒性，給藥第14天，載藥CCMC自聚集納米粒子與游離藥物均表現(xiàn)出顯著的腫瘤抑制作用，尤其是載藥CCMC納米粒子組對(duì)腫瘤的抑制作用隨著時(shí)間的延長(zhǎng)而增強(qiáng)，在給藥14天，腫瘤

8、抑制作用顯著強(qiáng)于游離藥物組。這可能是由于載藥CCMC納米粒子在體內(nèi)具有長(zhǎng)循環(huán)作用，這種長(zhǎng)循環(huán)的作用賦予了載藥CCMC納米粒子在被動(dòng)靶向過(guò)程中具有EPR效應(yīng)，增加藥物在腫瘤部位的蓄積，從而提高抗腫瘤效率。
　　 總之，膽固醇基羧甲基可德蘭衍生物可以通過(guò)自聚集的方法制備成納米粒子，制備方法簡(jiǎn)單可行。CCMC自聚集納米粒子可以作為抗腫瘤藥物載體包載雙親性或疏水性藥物，延緩藥物的釋放從而降低藥物的毒副作用，可望將其作為一種新型的抗腫瘤藥