VEGF對(duì)哮喘小鼠氣道血管生成-血管重塑影響的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、目的：研究血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子(VEGF)在哮喘小鼠氣道中表達(dá)變化及其對(duì)氣道血管生成/血管重塑的影響，探討VEGFR抑制劑對(duì)哮喘模型的干預(yù)作用。 方法：將40只雌性BALB/c小鼠隨機(jī)分為4組(每組10只)：生理鹽水對(duì)照組(A組)；哮喘組(B組)；VEGFR抑制劑干預(yù)組(C組)；地塞米松干預(yù)組(D組)。通過(guò)雞卵白蛋白(OVA)多次腹腔注射致敏和反復(fù)霧化激發(fā)建立慢性哮喘小鼠模型，C組和D組在OVA激發(fā)前1h分別予VEGFR抑制劑及地塞

2、米松腹腔注射。 1.在術(shù)次激發(fā)24 h后處死動(dòng)物，收集小鼠的支氣管肺泡灌洗液(BALF)，行白細(xì)胞計(jì)數(shù)和嗜酸粒細(xì)胞(EOS)計(jì)數(shù)；酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定(ELISA)法對(duì)各組小鼠BALF和血清中VEGF進(jìn)行定量分析。 2.取左肺組織和氣管制備病理切片，部分切片經(jīng)HE染色行病理學(xué)觀察，部分行免疫組化染色檢測(cè)VEGF蛋白在小鼠肺組織的表達(dá)水平，部分行抗Ⅷ因子免疫組化染色在顯微鏡下計(jì)數(shù)氣管粘膜固有層、粘膜下層的血管數(shù)目。 3

3、.用逆轉(zhuǎn)錄-聚合酶鏈方法(RT-PCR)檢測(cè)VEGF mRNA在小鼠肺組織表達(dá)水平。 4.采用醫(yī)學(xué)圖像分析軟件測(cè)定支氣管管壁厚度(WAt/Pbm)及肺組織切片中的血管數(shù)目。 結(jié)果： 1.各組BALF中自細(xì)胞總數(shù)、EOS百分比、VEGF濃度及血清中VEGF濃度分別為：A組為(6.82±1.56)×10<'5>/ml、(0.72±0.51)％、(32±8)pg/ml、(48±16)pg/ml，B組為(18.73±2.

4、46)×10<'5>/ml、(9.85±0.67)％、(52±12)pg/ml、(76±18)pg/ml，C組為(8.63±1.78)×10<'5>/ml、(2.85±0.67)％、(36±9)pg/ml、(46±14)pg/ml，D組為(8.73±1.64)×10<'5>/ml、(2.88±0.58)％、(38+8)pg/ml、(45±15)pg/ml，B組白細(xì)胞總數(shù)、EOS百分比、VEGF濃度明顯高于A組，與A組比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義

5、(P<0.01)；C、D兩組明顯低于B組，與B組比較差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01，C組與D組比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。 2.抗Ⅷ因子免疫組化染色顯示：B組氣管血管密度明顯高于A組(P<0.01)；C、D兩組與B組比較氣管血管密度顯著減少(P<0.05)；與C組比較，D組氣管血管密度略升高，但尚無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。 3.免疫組化結(jié)果顯示：B組VEGF蛋白在小鼠肺組織中的表達(dá)較A組顯著增加(P<0.

6、05)；C、D兩組的表達(dá)與B組比較均顯著減少(P<0.05)；C組與D組間比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。 4.RT-PCR結(jié)果顯示：B組小鼠肺組織VEGF mRNA的水平明顯高于A組(P<0.01)；C、D兩組VEGF mRNA水平明顯低于B組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01)；C組和D組間比較無(wú)顯著差異(P>0.05)。 5.圖像分析顯示：B組WAt/Pbm及肺組織切片中的血管數(shù)明顯高于A組(P<0.01)；經(jīng)

7、抑制劑及激素干預(yù)后C、D兩組的WAt/Pbm及肺組織切片中的血管數(shù)顯著降低，與B組比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01)；C組與D組間比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。 6.相關(guān)性分析結(jié)果：VEGF的水平與氣管血管密度、WAt/Pbm及肺組織切片中的血管數(shù)目皆呈正相關(guān)(r=0.814，P<0.01；r=0.643，P<0.01；r=0.650，P<0.05)。 結(jié)論： 1.VEGF在小鼠哮喘模型氣道及肺組織內(nèi)