化療藥物順鉑引起HBV再激活的體外試驗及其機制研究.pdf

1、乙型病毒性肝炎是一個影響全世界人們健康的重要公共衛(wèi)生問題。全球約有20億人感染HBV，其中約4億為HbsAg陽性的慢性感染者,而這類人群的3/4是來源于中國。通常情況下，慢性HBV感染者和無癥狀HBV攜帶者極少發(fā)生HBV再激活現象，但若接受腫瘤化療或免疫抑制治療時，則很有可能使靜息狀態(tài)或是低復制狀態(tài)的HBV活化；病毒的大量復制使肝功能受到損傷，從而導致急性肝炎、急性重癥肝炎、急性肝衰竭等嚴重的臨床問題。
　　但是，目前腫瘤患者接受

2、化療后HBV再激活的機制尚不清楚；比較公認的有兩種機制可以解釋該現象。其一，引發(fā)HBV再激活的抗腫瘤藥物大致可分為2類：傳統的細胞毒性藥物及與抗B、T細胞單克隆抗體治療相關的生物制劑，這些藥物多具有較強的免疫抑制效果；而機體的免疫力是抑制病毒復制和感染的最核心因素，當機體免疫力受到抑制時病毒的復制自然就增強了。其二，部分免疫抑制劑和化療藥物可以直接的促HBV復制。HBVDNA中含有糖皮質激素的作用元件，該類藥物可以直接作用于HBV增強子

3、Ⅰ，促進HBV基因的轉錄和復制。但是很少有研究報道化療藥物對HBV復制有無直接促進作用。
　　本實驗選擇了三種臨床常見的化療藥物：順鉑、長春新堿、表柔比星，分別將其直接添加在HBV復制的穩(wěn)定細胞系中（HepG2-HBV1.1和HepG2.2.15），通過Southern-blot和qRT-PCR法證實藥物處理組的細胞內及上清中的HBVDNA拷貝量比對照組明顯增加（P<0.05）；Western-blot方法檢測到藥物處理組的細胞內

4、的HBc-Ag表達比對照組明顯增加（P<0.05）；ELISE方法檢測到藥物處理組的細胞內的HBs-Ag、細胞上清中HBe-Ag和來自于HBV核心顆粒的HBc-Ag表達增加（P<0.05）；但上清中HBs-Ag及自于Dane顆粒的HBc-Ag表達量與對照組無明顯差異（P>0.05）。然后，以順鉑為代表研究其促HBV復制的機制。流式細胞術、免疫組化、BrdU、臺盼藍染色等方法提示順鉑處理細胞早期會使細胞產生大量的ROS,同時會引起細胞增殖

5、抑制和細胞周期S期阻滯。通過RT-PCR和qRT-PCR證實，順鉑處理后能使HBV轉錄因子水平普遍增高，且以PGC-1α及HNF-4α的增長最為明顯（P<0.05）。雙熒光素酶試驗提示提示順鉑處理細胞后，HBV的核心啟動子Cp、前S1（Sp1）和前S2/S（Sp2）啟動子活力增強。實驗結果表明，順鉑等化療藥物在體外試驗中可以直接促進HBV的復制，其機制可能是通過誘導體內ROS的產生，導致細胞DNA損傷及周期阻滯，使細胞內的養(yǎng)分和細胞器被