毛竹KdsD蛋白的原核表達純化及酶學(xué)性質(zhì)研究.pdf_第1頁
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文檔簡介

1、毛竹屬于禾本科竹亞科單子葉植物,其細胞壁主要成分由纖維素和果膠組成。植物果膠中的2-酮-3-脫氧辛糖酸(KDO)是非常保守的八碳糖,主要通過KDO合成途徑合成。該途徑中阿拉伯糖-5-磷酸異構(gòu)酶(Arabinose-5-phosphate isomerase,KdsD)[EC:5.3.1.13]是KOD合成途徑的第一個關(guān)鍵的限速酶。但禾本科毛竹中KdsD的結(jié)構(gòu)和生物學(xué)功能尚不清楚。本研究以毛竹為研究對象,進行了初步研究,結(jié)論如下;

2、  1.成功構(gòu)建得到毛竹KdsD蛋白的原核表達載體,經(jīng)過誘導(dǎo)、表達,成功獲得了大量重組蛋白的可溶性表達。
  2.表達產(chǎn)物經(jīng)Ni-NTA親和層析和分子篩層析(SEC)方法進行酶蛋白的分離純化步驟,得到純度85%以上的高純度酶;分子篩層析和BN-PAGE結(jié)果發(fā)現(xiàn)純化后的目的蛋白KdsD在溶液中主要以多聚體、二聚體和單體形式存在,這同微生物來源KdsD酶在溶液中以四聚體形式存在很大差異;進一步使用Western blotting和MA

3、LDI-TOF MASS技術(shù)對純化的蛋白進行鑒定。
  3.測定了毛竹KdsD酶學(xué)性質(zhì),證明該酶催化反應(yīng)的最適pH值為8.5,最適作用溫度為37℃,各種金屬離子在低濃度均對酶活性存在不同程度的影響作用,金屬離子Zn2+,Ca2+,Mg2+,Co2+對酶活性有激活作用,K+,Mn2+,F(xiàn)e2+,Cd2+對酶活性有抑制作用,其中以Fe2+和Cd2+對酶活性的抑制作用最強,而金屬離子Cu2+,Se2+,Li+,Na+對酶活性無明顯的影響

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