超聲微泡介導cy5熒光標記的ODN對UUO模型大鼠腎間質(zhì)纖維化的影響.pdf_第1頁
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文檔簡介

1、背景:目前腎間質(zhì)纖維化被認為是導致各種不同病因的慢性腎臟疾病不可逆進展到終末期的共同病理途徑,如何減緩甚至阻止腎間質(zhì)纖維化,便成為治療慢性腎臟疾病最為重要和關(guān)鍵的因素之一,也是目前研究的焦點。現(xiàn)普遍認為結(jié)締組織生長因子(CTGF)在此病理過程中有著相當重要的作用,將為研究治療腎間質(zhì)纖維化提供新的思路。而如何將干預CTGF的靶基因安全、有效的轉(zhuǎn)入體內(nèi)進行研究是一個迫切需要解決的現(xiàn)實問題,超聲介導是目前應(yīng)用最多的基因遞送技術(shù),其中最為成功的

2、載體是具有聲學響應(yīng)作用的含氣微泡,即超聲微泡。
   目的:觀察超聲微泡介導帶cy5熒光標記的結(jié)締組織生長因子反義寡核苷酸cy5-ODN轉(zhuǎn)染大鼠腎臟的有效性和安全性;研究超聲微泡介導結(jié)締組織生長因子反義寡核苷酸(cy5-ODN)對UUO模型大鼠腎間質(zhì)纖維化的影響。
   方法:⑴25只雄性SD大鼠隨機分為正常組,生理鹽水組(單純腎動脈注射NS組),超聲+cy5-ODN組(經(jīng)腎動脈注射)、微泡造影劑+cy5-ODN組(經(jīng)腎

3、動脈注射)及超聲聯(lián)合微泡造影劑+cy5-ODN組(經(jīng)腎動脈注射),每組5只,轉(zhuǎn)染完成后于第3天處死大鼠,取腎組織檢測熒光表達,過碘酸-希夫氏堿染色(PAS染色)觀察腎組織病理改變,以評價該方法的副作用。⑵25只雄性SD大鼠隨機分為正常對照組,UUO模型3d組,UUO模型3d+超聲微泡轉(zhuǎn)染cy5-ODN組,UUO模型7d組及UUO模型7d+超聲微泡轉(zhuǎn)染cy5-ODN組,每組5只,UUO模型建立與腎臟轉(zhuǎn)染同時完成,轉(zhuǎn)染完成后分別于第3、7天

4、處死大鼠,取腎組織檢測熒光表達,免疫組化觀察腎組織CTGF的表達,HE巳及Masson染色觀察腎間質(zhì)的變化。
   結(jié)果:①各組實驗結(jié)束后3天處死大鼠,與正常對照組、單純生理鹽水組、微泡+cy50DN組、超聲+cy50DN組比較,超聲+微泡造影劑組能顯著增強cy5ODN在腎組織的轉(zhuǎn)染效率,差異有統(tǒng)計學意義(P<0.01);超聲+微泡+cy5ODN組轉(zhuǎn)染3天后處死,取冰凍切片組織進行核染,轉(zhuǎn)染的cy5熒光的位置多位于腎小管及腎間質(zhì)

5、周圍(約占80%)。腎小球僅見很少部分熒光的表達;觀察轉(zhuǎn)染后7天cy5熒光強度較轉(zhuǎn)染3天明顯減弱,隨轉(zhuǎn)染后時間的延長,體內(nèi)表達量逐漸減少;單純生理鹽水組、微泡造影劑+cy5ODN組、超聲+cy5ODN組,超聲+微泡造影劑+cy5ODN組的血肌酐及乳酸脫氫酶的水平與正常對照組相比較,差異均沒有統(tǒng)計學意義(P>0.05);各實驗組均未見明顯的腎小球損傷,僅超聲微泡組可見少許散在的腎小管上皮細胞空泡樣變性。②Sham組在腎小管基底膜幾乎沒有C

6、TGF及CollagenⅣ的表達;UUO模型3D及UUO模型7D組可見明顯陽性的CTGF及CollagenⅣ在腎小管及腎間質(zhì)中表達,同時伴有腎小管的塌陷及萎縮,與Sham組比較,差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05);而相應(yīng)的UUO模型+ODN干預組其腎小管及腎間質(zhì)CTGF及CollagenⅣ陽性表達量較對應(yīng)的UUO模型組明顯減弱,差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05);同時將UUO模型+ODN干預7D組與UUO模型+ODN干預3D組進行比較,差異

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