疼痛通過(guò)影響TNFα-CDK5-NR2B表達(dá)損害術(shù)后學(xué)習(xí)記憶能力.pdf

1、【目的】
　　研究術(shù)后疼痛對(duì)于學(xué)習(xí)記憶的影響；突觸上的NR2B受體及其相關(guān)調(diào)節(jié)通路在這一過(guò)程中所起的作用。
　　【方法】
　　1.成年小鼠，隨機(jī)分4組：假手術(shù)組S；手術(shù)組I；假手術(shù)+EMLA組SE；手術(shù)+EMLA組IE。異氟醚麻醉下建立切口痛模型，SE和IE組術(shù)后小鼠足底涂抹局部鎮(zhèn)痛藥EMLA，術(shù)后24h采用曠場(chǎng)實(shí)驗(yàn)檢測(cè)S組、I組小鼠運(yùn)動(dòng)功能。術(shù)后3、7d用Von Frey纖毛檢測(cè)S、I、SE、IE組小鼠手術(shù)側(cè)縮足閾值

2、。學(xué)習(xí)記憶能力的測(cè)定則采用條件恐懼實(shí)驗(yàn)，術(shù)后1d對(duì)各組小鼠進(jìn)行訓(xùn)練，術(shù)后3、7、30d分別檢測(cè)小鼠對(duì)環(huán)境的記憶和對(duì)聲音的記憶。
　　2.成年小鼠，隨即分為2組：假手術(shù)組S1和手術(shù)組I1,術(shù)前24h，進(jìn)行條件恐懼記憶訓(xùn)練，術(shù)后1d、5d分別檢測(cè)小鼠的記憶能力。
　　3.成年小鼠，隨機(jī)分4組：假手術(shù)+roscovitine組SR；手術(shù)+roscovitine組IR；假手術(shù)+對(duì)照溶液組SC；手術(shù)+對(duì)照溶液組IC，術(shù)后1d對(duì)各組小鼠

3、進(jìn)行訓(xùn)練形成條件恐懼記憶，然后在術(shù)后3、7d分別檢測(cè)小鼠對(duì)環(huán)境的記憶和對(duì)聲音的記憶。
　　4.術(shù)后3、7d取材，分離海馬和皮層，Western Blot測(cè)定NR2B、CDK5和TNFα等的的表達(dá)變化
　　5.成年SD大鼠分為4組，生理鹽水注射組；完全氟氏佐劑（CFA）注射組；CFA注射+Roscovitine組;CFA注射+溶劑對(duì)照組。處理后一周內(nèi)檢測(cè)熱痛閾值，并取材檢測(cè)脊髓背角CDK5，P35-25以及下游調(diào)節(jié)蛋白的表達(dá)變

4、化。
　　【結(jié)果】
　　1.術(shù)后3d，I組小鼠的機(jī)械痛閾比S組明顯降低，術(shù)后7d恢復(fù)到正常水平。兩組的平均運(yùn)動(dòng)速度和運(yùn)動(dòng)距離沒有明顯差異。術(shù)后3d測(cè)IE組小鼠機(jī)械痛閾與S組和SE組相比，沒有明顯差異
　　2.條件恐懼實(shí)驗(yàn)顯示，術(shù)后訓(xùn)練組，術(shù)后3d、7d，I組小鼠對(duì)聲音記憶檢測(cè)的凝滯時(shí)間比S組明顯縮短，而對(duì)環(huán)境記憶兩組沒有明顯差異。IE組小鼠對(duì)聲音記憶的檢測(cè)中，凝滯時(shí)間比I組明顯延長(zhǎng)；與S組和SE組相比，沒有明顯的差異。

5、IR組對(duì)于聲音記憶的凝滯時(shí)間比IC組明顯延長(zhǎng)，與SR組相比較沒有明顯差異。在術(shù)后30d，S，I組小鼠在環(huán)境記憶和聲音記憶檢測(cè)中均沒差異。術(shù)前訓(xùn)練組，S1和I1組術(shù)后對(duì)環(huán)境記憶和聲音記憶的檢測(cè)均沒明顯差異。
　　3.術(shù)后3d I組小鼠與S組相比，皮層突觸上NR2B表達(dá)下降，TNFα、CDK5、P35-P25表達(dá)均增高，在海馬中表達(dá)無(wú)明顯差異。在IE組，EMLA逆轉(zhuǎn)了I組皮層蛋白的變化；IR組中，Roscovitine也逆轉(zhuǎn)了I組皮層