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文檔簡介
1、目的:通過觀察異丙酚聯(lián)合電休克治療(electroconvulsive therapy,ECT)抑郁大鼠后抑郁行為、學(xué)習(xí)記憶功能及海馬神經(jīng)型一氧化氮合酶(neuronal nitric oxide synthase,nNOS)-Dexras1通路相關(guān)蛋白表達(dá)的變化,探討異丙酚減輕電休克后抑郁大鼠學(xué)習(xí)記憶損害的分子機(jī)制。
方法:清潔級雄性SD大鼠,鼠齡12周,體重200~250g。采用慢性輕度不可預(yù)見性應(yīng)激(chronic un
2、predictable mild stress,CUMS)建立抑郁模型。采用隨機(jī)數(shù)字表法,將選取抑郁模型建立成功的大鼠40只,隨機(jī)分為4組(n=10):抑郁組(D組)腹腔注射生理鹽水8ml/kg;單純丙泊酚組(DP組)腹腔注射異丙酚80mg/kg;單純ECT組(DE組)腹腔注射生理鹽水8ml/kg后實施電休克處理(參數(shù)設(shè)置為雙相矩形波、波幅0.8A、波寬1.5ms、頻率1.25Hz、時程0.8s、電量120mC);異丙酚+ECT組(DP
3、E組)腹腔注射異丙酚80mg/kg待翻正反射消失后實施電休克處理。以上處理每天1次,連續(xù)7d。建模前、建模后、處理結(jié)束后采用糖水偏好實驗、Open-field實驗(水平活動距離和直立次數(shù))評價大鼠抑郁狀態(tài)。建模后、處理結(jié)束后采用Morris水迷宮實驗(逃避潛伏期和空間探索時間)檢測學(xué)習(xí)記憶能力。所有測試完成后處死大鼠,采用免疫組織化學(xué)法檢測大鼠海馬CA1、CA3、DG區(qū)nNOS、CAPON的表達(dá),免疫熒光標(biāo)記和激光共聚焦技術(shù)檢測大鼠海馬
4、CA1、CA3、DG區(qū)Dexras1表達(dá),逆轉(zhuǎn)錄聚合酶連反應(yīng)(RT-PCR)法檢測海馬nNOS、CAPON、Dexras1 mRNA的表達(dá)。
結(jié)果:
(1) Open-field評分:與建模前比較,建模后大鼠水平活動距離和直立次數(shù)減少(P<0.05);處理前4組水平活動距離和直立次數(shù)差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05);處理后,與D組比,DE組和DPE組水平活動距離和直立次數(shù)增加(P<0.05)。
(2)糖水偏
5、好:與建模前比較,建模后大鼠糖水偏好百分比降低(P<0.05);處理前4組大鼠糖水偏好百分比差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05);處理后,與D組比,DE組和DPE組糖水偏好百分比增加(P<0.05)。
(3)學(xué)習(xí)記憶功能:處理前,4組大鼠逃避潛伏期、空間探索時間差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05);處理后,與D組比,DE組逃避潛伏期延長、空間探索時間縮短(P<0.05);與DE組比,DPE組逃避潛伏期縮短、空間探索時間延長(P<0.0
6、5)。
(4)海馬nNOS和CAPON蛋白表達(dá):與D組比,DP組nNOS、CAPON蛋白和mRNA表達(dá)減少(P<0.05),DE組nNOS蛋白和mRNA表達(dá)增加(P<0.05),CAPON蛋白和mRNA表達(dá)減少(P<0.05),nNOS/CAPON比值增加(P<0.05);與DE組比,DPE組nNOS蛋白和mRNA表達(dá)減少(P<0.05),CAPON蛋白和mRNA表達(dá)增加(P<0.05),nNOS/CAPON比值降低(P<0.
7、05)。
(5)相關(guān)分析:海馬CA1、CA3、DG區(qū)nNOS、CAPON、nNOS/CAPON與逃避潛伏期和空間探索時間有相關(guān)性,nNOS/CAPON比nNOS、CAPON與逃避潛伏期和空間探索時間更為相關(guān)。
(6)海馬Dexras1的表達(dá):與D組比,DP組Dexras1蛋白和mRNA表達(dá)降低(P<0.05),DE組Dexras1蛋白和mRNA表達(dá)減少(P<0.05);與DE組比,DPE組Dexras1蛋白和mRNA
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