孕期MVAD通過(guò)RARα、Src和NR1信號(hào)通路影響仔鼠學(xué)習(xí)記憶功能機(jī)制的研究.pdf

1、目的：
　　探討從孕期開(kāi)始的MVAD對(duì)仔鼠成年期學(xué)習(xí)記憶功能影響中，RARα對(duì)NR1的影響是否通過(guò)調(diào)節(jié)Src來(lái)實(shí)現(xiàn)，并探討RARα、Src和NR1三者之間的聯(lián)系。
　　方法：
　　構(gòu)建孕期VAN和MVAD大鼠模型（VAN組和MVAD組）；分離培養(yǎng)兩組新生鼠原代海馬神經(jīng)元，并利用細(xì)胞免疫熒光染色鑒定；利用real-time RCR和western blot檢測(cè)孕期MVAD和VAN組新生鼠海馬組織及原代海馬神經(jīng)元細(xì)胞RA誘

2、導(dǎo)前后RARα、SFKs和NR1的mRNA和蛋白表達(dá)量；利用細(xì)胞免疫熒光檢測(cè)RA誘導(dǎo)處理細(xì)胞前后三個(gè)指標(biāo)的熒光表達(dá)量；體外利用RARα沉默和過(guò)表達(dá)以及空載腺病毒轉(zhuǎn)染VAN組和MVAD組神經(jīng)元細(xì)胞檢測(cè)三個(gè)指標(biāo)的mRNA表達(dá)量；Src家族抑制劑PP2誘導(dǎo)處理神經(jīng)元后，western blot檢測(cè)三個(gè)指標(biāo)蛋白表達(dá)量；利用免疫共沉淀檢測(cè)RARα與Src以及NR1是否有相互作用；利用鈣影像儀檢測(cè)對(duì)照及處理組細(xì)胞的鈣興奮性；利用Morris水迷宮實(shí)

3、驗(yàn)檢測(cè)孕期MVAD和VAN組7周齡仔鼠空間學(xué)習(xí)記憶的能力。
　　結(jié)果：
　?、俪晒?gòu)建了孕期MVAD和VAN孕鼠模型；
　　②免疫熒光染色顯示，分離培養(yǎng)的新生鼠原代海馬神經(jīng)元95％表達(dá)神經(jīng)元標(biāo)志物神經(jīng)元特異性烯醇化酶（NSE）；
　?、墼衅贛VAD新生鼠海馬組織以及神經(jīng)元中RARα、SFKs和NR1的mRNA和蛋白表達(dá)量明顯低于VAN組（P＜0.05）；
　?、茉衅贛VAD組神經(jīng)元鈣興奮性明顯低于VAN組（

4、P＜0.05）；
　?、萃ㄟ^(guò)水迷宮實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)孕期MVAD組生后7W仔鼠其學(xué)習(xí)記憶功能明顯低于孕期VAN組仔鼠（P＜0.01）；
　?、摅w外予1μmol/L的RA處理神經(jīng)元細(xì)胞24h后，RARα、SFKs和NR1的mRNA和蛋白表達(dá)量明顯增加（P＜0.001），免疫熒光染色發(fā)現(xiàn)樹(shù)突明顯增長(zhǎng)且樹(shù)突中RARα表達(dá)明顯升高，并且RA處理后的神經(jīng)元細(xì)胞鈣興奮性明顯升高（P＜0.01）；
　?、唧w外予神經(jīng)元RARα沉默（Si-RAR

5、α）和過(guò)表達(dá)（Over-RARα）干預(yù)后，Src的mRNA表達(dá)變化同RARα一致，有相應(yīng)的降低和升高，且變化有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P＜0.05），NR1無(wú)顯著變化；
　?、囿w外給神經(jīng)元細(xì)胞予Src家族激酶抑制劑PP2處理，發(fā)現(xiàn)NR1的蛋白表達(dá)變化明顯降低，RARα蛋白無(wú)顯著變化；
　?、嵩衅贛VAD和VAN組生后2W齡仔鼠的海馬組織進(jìn)行免疫共沉淀發(fā)現(xiàn)，RARα與Src有結(jié)合，說(shuō)明兩者有相互作用，而RARα與NR1無(wú)相互作用；