一株豬源大腸桿菌的分離鑒定及耐藥性分析.pdf

1、近十幾年來，為防治疾病及促進(jìn)生長，大量抗菌藥物應(yīng)用于集約化養(yǎng)豬生產(chǎn)中?？咕幬镩L期、廣泛和不合理使用以及抗菌藥物的選擇壓力等原因使大腸桿菌耐藥菌株不斷增多、耐藥譜不斷擴(kuò)大，有的菌株甚至對尚未用于臨床的新型抗菌藥物也表現(xiàn)出了耐藥性。因此，積極開展豬源大腸桿菌耐藥性監(jiān)測，闡明耐藥表型與基因型特征，將有利于遏制大腸桿菌耐藥性發(fā)生發(fā)展，優(yōu)化抗菌藥物的合理應(yīng)用，通過聯(lián)合用藥有利于防治大腸桿菌。
　　 本文采集豬場患病豬只的病料，經(jīng)細(xì)菌分離

2、純化，運(yùn)用細(xì)菌培養(yǎng)特性試驗、生化試驗和16srRNA測序鑒定等方法鑒定臨床分離菌株。該分離菌為一株致病性大腸桿菌。通過WHO推薦的Kirby-Bauer(K-B)法測定其對24種抗菌藥物的耐藥性。根據(jù)藥敏試驗結(jié)設(shè)計了13對引物分別為TEM、SHV、CTX-M-1、CTX-M-8、CTX-M-9、OXA-1、OXA-2、CMY-4、OXA-10、erm、ant(6)-iv、aac(6')/aph(2")、tetM，并擴(kuò)增細(xì)菌基因組的耐藥基

3、因。采用微量肉湯稀釋法測定加替沙星、頭孢噻肟鈉、丁胺卡那、慶大霉素、磷霉素和鹽酸左旋氧氟沙星分別對豬源大腸桿菌耐藥菌株的最低抑菌濃度(minimuminhibitoryconeentration，MIC)。采用6×6棋盤法分別測定了加替沙星與其余五種抗生素的體外聯(lián)合抗菌活性。
　　 試驗結(jié)果表明，從培養(yǎng)特性、生化試驗說明所分離菌株為大腸桿菌。16srRNA測序結(jié)果表明分離菌株與大腸桿菌E482(EscherichiacoliE4

4、82)同源性達(dá)99.9％。藥敏試驗結(jié)果表明分離株大腸桿菌對于阿莫西林、氨芐西林、青霉素、頭孢噻呋鈉、新霉素、慶大霉素、安普霉素、克林沙星、環(huán)丙沙星、恩諾沙星、鹽酸左旋氧氟沙星、強(qiáng)力霉素、土霉素、紅霉素、磷霉素、氟苯尼考高度耐藥(R)，對于哌拉西林、比阿培南、粘桿菌素耐藥(R)，對于頭孢曲松、頭孢噻肟、氨曲南中度敏感(I)，對于美羅培南、丁胺卡那敏感(S)。加替沙星、頭孢噻肟鈉、丁胺卡那、慶大霉素、磷霉素和鹽酸左旋氧氟沙星分別對豬源大腸桿

5、菌耐藥菌株的最低抑菌濃度(MIC)分別為16ug/ml、64ug/ml、256ug/ml、512ug/ml、512ug/ml、256ug/ml。加替沙星與慶大霉素的FIC為0.5；加替沙星與鹽酸左旋氧氟沙星的FIC為0.375；加替沙星與頭孢噻肟鈉的FIC為0.75；加替沙星與丁胺卡那的FIC為0.625；加替沙星與磷霉素的FIC為0.75。
　　 該株分離菌與大腸桿菌E482(EscherichiacoliE482)同源性達(dá)9