柴胡黃芩配伍應(yīng)用對(duì)小鼠急性癲癇模型的影響.pdf

1、目的與意義:
　　 癲癇是一類由多種原因所導(dǎo)致的腦部神經(jīng)元的高度同步化異常放電而引起的以短暫性中樞神經(jīng)系統(tǒng)功能失常為表現(xiàn)特征的臨床綜合征。根據(jù)病因的不同，癲癇一般分為兩大類:既原發(fā)性癲癇和繼發(fā)性癲癇。癲癇最為突出的臨床特點(diǎn)是:反復(fù)發(fā)作，每次發(fā)作的不可預(yù)知以及需要長期的藥物治療。癲癇是神經(jīng)系統(tǒng)最常見的疾病之一，是目前國內(nèi)外神經(jīng)科僅次于腦血管病及癡呆的第三大常見疾病。據(jù)流行病學(xué)資料統(tǒng)計(jì)，全世界約有5000萬人口受到這種疾病的影響，近

2、年我國的流行病學(xué)研究表明，有約900萬癲癇患者，各地癲癇患病率在3.6‰-7.0‰不等。在我國廣大農(nóng)村地區(qū)，癲癇的患病率約為4.7‰-8.5‰，與全世界總體患病率基本相等，其中，約70％-80％癲癇患者未接受治療或治療不規(guī)范，死亡率約為7.9/10萬。由此可見，我國的癲癇患病率接近于發(fā)達(dá)國家，但死亡率卻遠(yuǎn)高于世界水平，針對(duì)這一社會(huì)現(xiàn)象必須給予足夠的重視。一直以來，癲癇患者同正常人群相較，都被認(rèn)為會(huì)有更大的形成認(rèn)知及行為障礙的概率。雖然存

3、在明顯的個(gè)體差異，但每個(gè)癲癇患者仍舊都會(huì)有認(rèn)知能力受損害的風(fēng)險(xiǎn)。在癲癇發(fā)作頻率高的患者中，認(rèn)知功能和行為能力的損傷就會(huì)不斷積累，從而使其語言能力、學(xué)習(xí)記憶力、注意力、定向力、行為以及情緒等均產(chǎn)生了不同程度的變化。
　　 目前，國內(nèi)外治療癲癇的標(biāo)準(zhǔn)是應(yīng)用抗癲癇藥物，而應(yīng)用抗癲癇藥物需要達(dá)到的目標(biāo)即是消除癲癇發(fā)作，但是對(duì)引起癲癇的病理改變卻無影響，且也不能阻斷癲癇的進(jìn)程。盡管目前抗癲癇藥物的研究取得了很多進(jìn)展，各種不同的新型抗癲癇藥

4、物不斷問世，可是仍然有約1/3的癲癇病患者對(duì)藥物的治療不敏感。并且長期的癲癇發(fā)作和不間斷的服用藥物不但給患者家庭及社會(huì)帶來相當(dāng)大的經(jīng)濟(jì)負(fù)擔(dān)。幾乎所有的抗癲癇藥物都有不止一種副作用，且差不多全部抗癲癇藥物都有損害認(rèn)知功能的可能性。同時(shí)又由于手術(shù)適應(yīng)癥的局限性、手術(shù)對(duì)顱腦功能的損害及昂貴的治療費(fèi)用等一系列相關(guān)因素，大大限制了外科手術(shù)治療的應(yīng)用。
　　 癲癇屬中醫(yī)“癇病”范疇，是一種發(fā)作性神志異常的疾病。因氣機(jī)逆亂，元神失控而致精神恍

5、惚，甚則突然仆倒，昏不知人等，移時(shí)蘇醒后如常人的一類病癥。中醫(yī)中癲癇的病因病機(jī)與“痰”密不可分，亦與“肝”息息相關(guān)。既往研究表明，中醫(yī)治療癲癇有著悠久的歷史，并且對(duì)現(xiàn)代醫(yī)學(xué)及后人有著深遠(yuǎn)的影響。眾多經(jīng)方中的方劑對(duì)現(xiàn)代研究仍具有重要的指導(dǎo)意義，與此同時(shí)中醫(yī)治療癲癇也在與時(shí)俱進(jìn)的發(fā)展。并且中藥相對(duì)于西藥而言，有毒副作用小及價(jià)格低廉等優(yōu)勢。癲癇“從肝論治”歷史綿長，當(dāng)代癲癇“從肝論治”多沿用《傷寒論》諸柴胡方加減。
　　 最大電休克模

6、型(MES)、戊四氮(PTZ)驚厥模型、士的寧(STR)驚厥模型及匹羅卡品(PLCP)驚厥模型是應(yīng)用最多的癲癇發(fā)作模型?？梢砸种埔陨纤姆N動(dòng)物模型驚厥發(fā)作的藥物，可能對(duì)控制臨床癲癇的發(fā)作有效。
　　 本課題組前期研究表明:柴胡皂苷a在戊四氮、匹羅卡品、最大電休克所致動(dòng)物癲癇中，有抗驚厥作用。另有研究顯示:黃芩在匹羅卡品所致癲癇模型有抗驚厥及神經(jīng)保護(hù)作用。藥對(duì)是方劑中最基本的組成形式，在中醫(yī)源遠(yuǎn)流長的發(fā)展長河中，有著悠久的歷史，經(jīng)方

7、中眾多經(jīng)典藥對(duì)沿用至今。現(xiàn)代對(duì)于中藥藥對(duì)的臨床研究、理論研究、實(shí)驗(yàn)研究均有不同程度的進(jìn)步和發(fā)展。藥對(duì)經(jīng)過配伍后，并不是做了一個(gè)簡單的成分之間的加法，通常隨之發(fā)生的是繁復(fù)的化學(xué)及物理變化，其中的化學(xué)成分就隨之產(chǎn)生了變化。同時(shí)亦有研究表明，藥對(duì)配伍可提高藥物溶解度、提高藥物靶向性、有藥動(dòng)學(xué)行為改變。
　　 張仲景以柴胡黃芩藥對(duì)為基本組成，治療黃疸、肝郁氣滯所致的痞積腫塊等多種病證，療效顯著?！侗静菥V目》:“柴胡行手足少陽，以黃芩為佐

8、?！薄侗静菔鲢^元》云柴胡“宣暢血脈，佐以黃芩為妙”。本課題組提倡癲癇“從肝論治”，自擬中藥復(fù)方柴胡疏肝湯，在臨床上取得了滿意的治療效果。柴胡為方中君藥，臣以黃芩共奏和解少陽，疏理肝膽之功，又可疏暢氣機(jī)與養(yǎng)肝柔肝相結(jié)合。故本研究建立了最大電休克、戊四氮、士的寧、匹羅卡品四個(gè)小鼠急性癲癇模型，擬進(jìn)一步探討柴胡黃芩配伍應(yīng)用的抗癲癇作用。
　　 方法與內(nèi)容:
　　 1最大電休克癲癇小鼠造模及處理
　　 使用YSD-4G藥

9、理生理實(shí)驗(yàn)多用儀篩選符合要求的小鼠，齒狀?yuàn)A以生理鹽水浸濕后，夾住小鼠兩耳尖部，進(jìn)行交流電刺激，主要刺激參數(shù)為100V，2Hz（預(yù)實(shí)驗(yàn)結(jié)果），單次刺激方式，以后肢強(qiáng)直性伸直為驚厥指標(biāo)，篩選符合條件的小鼠60只，隨機(jī)分為6組，每組均為灌胃給藥，灌胃前空腹8小時(shí)，A組（模型組）予等體積生理鹽水，B組按柴胡黃芩5∶2給藥，其中柴胡濃度為0.3g/ml，C組按柴胡黃芩1∶1給藥，其中柴胡濃度為0.21g/ml，D組（柴胡組）、E組（黃芩組）濃度均

10、為0.42g/ml，F(xiàn)組（地西泮組）濃度為0.4g/ml。末次給藥1h后再行上述電刺激，記錄驚厥數(shù)和強(qiáng)直持續(xù)的時(shí)間，計(jì)算驚厥率。
　　 2戊四氮急性癲癇小鼠造模及處理
　　 選取SPF級(jí)昆明小鼠60只，分組及給藥方法同MES癲癇小鼠，在末次給藥1h后，各組予戊四氮85mg/kg腹腔注射，立即觀察小鼠的癇性發(fā)作30min，小鼠癇性發(fā)作分級(jí)采用Racine標(biāo)準(zhǔn)。記錄小鼠癇性發(fā)作的潛伏期，包括陣發(fā)性痙攣潛伏期（即從注射戊四氮開

11、始至相當(dāng)于1-3級(jí)發(fā)作的時(shí)間）、強(qiáng)直性驚厥潛伏期（即從注射戊四氮開始至相當(dāng)于5級(jí)發(fā)作的時(shí)間）、死亡潛伏期。
　　 3士的寧急性驚厥小鼠造模及處理
　　 選取SPF級(jí)昆明小鼠60只，分組及給藥方法同MES癲癇小鼠，在末次給藥1h后，各組予士的寧2mg/kg腹腔注射，立即觀察小鼠的癇性發(fā)作15min，記錄小鼠發(fā)生發(fā)作性陣攣潛伏期、死亡潛伏期。
　　 4匹羅卡品急性驚厥小鼠造模及處理
　　 選取SPF級(jí)昆明小鼠

12、60只，分組及給藥方法同MES癲癇小鼠，在末次給藥1h后，各組予匹羅卡品400mg/kg腹腔注射，立即觀察小鼠的癇性發(fā)作30min，記錄小鼠發(fā)生發(fā)作性陣攣潛伏期及死亡潛伏期。
　　 5統(tǒng)計(jì)學(xué)方法
　　 數(shù)據(jù)用SPSS13.0軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析，計(jì)量資料用(x)±s表示，各組比較采用重復(fù)測量的方差分析，組間比較采用Tukey法;強(qiáng)直性驚厥發(fā)作率的比較用R×C表資料的卡方檢驗(yàn);P＜0.05表示差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，P＜0.01表

13、示差異有顯著統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　 結(jié)果:
　　 1柴胡黃芩配伍應(yīng)用對(duì)最大電休克模型的影響
　　 各組之間的驚厥率差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(x2=59.000，P＜0.001)，B、C、D、F組均能降低小鼠驚厥率，其中以B、F組降低明顯。
　　 2柴胡黃芩配伍應(yīng)用對(duì)戊四氮急性致病小鼠發(fā)作性陣攣潛伏期、發(fā)作性強(qiáng)直潛伏期及死亡潛伏期的影響
　　 B、C、D、E、F組均能延長小鼠發(fā)作性陣攣潛伏期、發(fā)作性強(qiáng)直潛伏期及

14、死亡潛伏期，與A組相比，C、D、E組無顯著差異，B、F組有顯著差異。
　　 3柴胡黃芩配伍應(yīng)用對(duì)士的寧急性致癇小鼠發(fā)作性陣攣潛伏期及死亡潛伏期的影響
　　 B、C、D、E、F組均能延長小鼠發(fā)作性陣攣潛伏期，但與A組相比較均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。B、C、D、E、F組均能延長小鼠死亡潛伏期，與A組相比，C、D、E組無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，B、F組有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.01)，且B組同C、D、E組比有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.01)。