褪黑素增強順鉑對人食管癌細胞的增殖抑制作用及其可能機制.pdf

1、目的:觀察褪黑素(Melatonin,Mel)聯(lián)合順鉑(Cisplatin,DDP)對人食管癌細胞Eca109增殖和凋亡的影響,并探討其參與誘導(dǎo)凋亡的可能機制。為Mel應(yīng)用于食管癌的臨床治療提供實驗依據(jù)。
　　方法:①以DDP(2.5mg·L-1)、不同濃度Mel(10-9～10-5mol·L-1)以及不同濃度的兩種藥物聯(lián)合作用于人食管癌細胞株Eca109,通過MTT實驗檢測用藥前后對食管癌細胞株Eca109增殖的影響,并計算抑制

2、率;
　　②選擇5個濃度Mel(10-9、10-8、10-7、10-6、10-5mol·L-1)分別與DDP(2.5mg·L-1)聯(lián)合應(yīng)用處理食管癌細胞Eca109,采用CDI分析兩藥相互作用性質(zhì);
　?、弁ㄟ^集落克隆形成實驗觀察用藥前后對細胞集落克隆形成的影響;
　?、芡ㄟ^流式細胞儀檢測用藥前后細胞凋亡率的變化;
　?、萃ㄟ^Western免疫印跡(Western Blotting)方法分析Bax、Bcl-2蛋白

3、的表達情況,研究Mel增強DDP療效的可能機制。
　　結(jié)果:①DDP(2.5mg·L-1)與不同濃度Mel聯(lián)合用藥組對食管癌細胞Eca109生長抑制率明顯高于單獨使用DDP或Mel組;
　?、谙盗袧舛萂el與DDP聯(lián)合應(yīng)用于食管癌細胞Eca109,在一定的濃度范圍內(nèi)顯示出不同程度的協(xié)同或相加作用,尤其當Mel劑量較低時,協(xié)同作用更加明顯,聯(lián)合用藥組與單獨用藥組之間的差異具有顯著性。
　?、跰el可增強DDP抑制人食管癌

4、Eca109細胞的集落克隆形成。
　?、?0-5mol·L-1Mel誘導(dǎo)人食管癌Eca109細胞的24h凋亡率為7.8％,10-5mol·L-1Mel與2.5mg·L-1DDP聯(lián)合刺激人食管癌Eca109細胞的24h凋亡率為32%,高于DDP本身誘導(dǎo)的24h凋亡率9.7%;
　?、軼estern Blotting法檢測結(jié)果顯示,相比較對照組,Mel與DDP單用或聯(lián)用后食管癌Eca109細胞的Bcl-2蛋白表達減弱,條帶變淡,