Trolox增強三氧化二砷對HL-60細胞毒性作用的研究.pdf

1、癌癥是嚴重危害人類健康的主要疾病。其發(fā)生是一個非常復雜的過程,該過程是無控制的細胞增殖伴隨著細胞凋亡的抑制。大部分的化療藥物都是通過抑制癌細胞生長和誘導凋亡的方式發(fā)揮他們的細胞毒性作用,所以用藥物誘導腫瘤細胞凋亡是有效的治療途徑。
　　三氧化二砷(As2O3)作為臨床治療急性早幼粒白血病(acute promyelocytic leukemia,APL)藥物,具有很好的療效。As2O3只能在較高的濃度下誘導非APL細胞發(fā)生凋亡,因

2、此其毒性限制了臨床應用。有資料表明,在體外實驗中一些抗氧化劑能夠促進低濃度As2O3誘導細胞的凋亡作用。
　　Trolox,也稱水溶性維生素E(6-Hydroxy-2,5,7,8-tetramethylchroman-2- carboxylic acid),為維生素E衍生物。由于其較好的細胞通透性而可發(fā)揮較強的抗氧化活性,近年來在科學研究中應用廣泛。如用Trolox協(xié)同As2O3作用,可能在誘導細胞凋亡的同時減小As2O3細胞毒作

3、用,使As2O3更廣泛的應用于臨床。
　　本文利用MTT,臺盼藍排染,Hoechst33258熒光染色、瑞氏-姬姆薩染色、單細胞凝膠電泳、流式細胞術以及DCHF-DA法檢測了As2O3單獨及聯(lián)合Trolox后對人早幼粒白血病細胞HL-60的增殖抑制、凋亡誘導作用、DNA損傷作用、周期阻滯和活性氧含量的影響,并通過單細胞凝膠電泳法檢測Trolox聯(lián)合As2O3對人外周血單個核細胞DNA損傷的影響。結果表明:
　　(1)低濃度A

4、s2O3(≤4μmol·L-1)對HL-60細胞具有生長抑制效應,聯(lián)合100μmol·L-1 Trolox后,可以顯著增強As2O3對細胞的生長抑制作用,較高濃度的As2O3(≥8μmol·L-1)聯(lián)合Trolox作用能夠誘導HL-60細胞死亡。生長抑制效應和致死效應都表現(xiàn)出顯著的時間和As2O3的劑量依賴性。
　　(2)As2O3作用于HL-60細胞可以導致細胞DNA損傷,損傷率具有明顯的劑量效應;聯(lián)合100μmol·L-1 T

5、rolox后,HL-60細胞DNA損傷明顯增強。DNA損傷可能是單獨及聯(lián)合作用引起細胞生長抑制及死亡的主要因素之一。
　　(3)As2O3聯(lián)合100μmol·L-1 Trolox可顯著影響細胞的周期分布,使細胞發(fā)生G2/M期周期阻滯;G2/M期阻滯可能是細胞DNA損傷激活檢驗點的結果。姬姆薩和熒光染色的結果中細胞出現(xiàn)的多核狀態(tài),說明也可能是藥物影響細胞骨架及分裂裝置構建造成了 G2/M期阻滯。周期阻滯可能是 As2O3聯(lián)合100μ

6、mol·L-1 Trolox誘導細胞凋亡的上游事件。
　　(4)As2O3作用于 HL-60細胞可導致細胞內(nèi)活性氧含量的增加,并表現(xiàn)出明顯的劑量效應;聯(lián)合100μmol·L-1Trolox后,低濃度 As2O3使得活性氧含量進一步升高。
　　(5)流式細胞術的結果顯示聯(lián)合組加入過氧化氫酶對細胞的凋亡率并沒有影響,說明Trolox的增強As2O3誘導凋亡作用與細胞外H2O2的生成無關。
　　(6)在正常人外周血單個核細胞