促紅細(xì)胞生成素MCAO大鼠鼻內(nèi)給藥對腦組織中腦紅蛋白表達、NOS活性和NO含量的作用.pdf

1、目的：近年來，缺血性腦血管病的發(fā)病率逐年增高，致死率及致殘率高，嚴(yán)重影響患者的生活質(zhì)量。促紅細(xì)胞生成素（erythropoietin，EPO）是一種有組織保護作用的造血生長因子，在細(xì)胞培養(yǎng)及哺乳動物的多種神經(jīng)系統(tǒng)疾病模型中均顯示了明確的組織保護作用。但是，EPO是一種大分子糖蛋白，血腦屏障透過率低，在各種動物實驗?zāi)Ｐ椭?，EPO發(fā)揮神經(jīng)保護作用的劑量偏高，并且應(yīng)用EPO有多種副作用，限制了EPO作為腦保護劑臨床應(yīng)用的可能性。腦紅蛋白（ne

2、uroglobin，NGB）是一種新發(fā)現(xiàn)的攜氧球蛋白，主要在神經(jīng)組織中表達，參與細(xì)胞供氧及NO和氧自由基清除。鼻內(nèi)給藥途徑可以不經(jīng)血腦屏障，直接將EPO遞送到達腦組織，是一種簡便的非侵入性給藥途徑。本研究中，我們采用鼻內(nèi)給藥和腹腔注射兩種給藥途徑應(yīng)用EPO，觀察NGB在不同時間點的表達情況，以及梗死24小時的NO含量和NOS活性，以探討EPO的腦保護途徑，為臨床上鼻內(nèi)應(yīng)用EPO提供實驗證據(jù)。
　　 方法：100只SD大鼠隨機分為

3、4組，即鼻內(nèi)給藥組、腹腔注射組、假手術(shù)對照組和生理鹽水對照組。大腦中動脈閉塞模型（MCAO）建立成功后，按12h、24h和48h，3個時間點隨機分為3個亞組，參照Longa等[1]的線栓法制作大鼠MCAO模型；假手術(shù)對照組不插線，腦缺血10分鐘后，鼻內(nèi)應(yīng)用20U/20μl的重組人促紅細(xì)胞生成素（RHEPO），經(jīng)腹腔注射3000U/kgRHEPO。在相應(yīng)時間點對大鼠進行行為學(xué)評分，過量麻醉后斷頭處死大鼠，取出完整的腦組織，分別行蘇木精-伊

4、紅染色觀察病理，免疫組織化學(xué)染色檢測NGB表達。應(yīng)用硝酸還原酶法測定腦組織NO的含量，化學(xué)比色法測定腦組織NOS的活性。
　　 結(jié)果：腦缺血缺氧后NGB表達增加，假手術(shù)組未見NGB表達，RHEPO腹腔注射和鼻內(nèi)給藥在三個時間點NGB陽性細(xì)胞數(shù)均高于生理鹽水對照組。12h和24h時，兩種給藥方式的NGB陽性細(xì)胞數(shù)無顯著差異；48h時，與鼻內(nèi)給藥相比，腹腔給藥組NGB陽性細(xì)胞數(shù)多。腦梗死后24h，NO含量和NOS活性增加，EPO兩種