表面多功能化納米粒子制備及其腫瘤細胞靶向體外研究.pdf

1、本文以酰氯化方法合成了單端生物素化的聚乙二醇，并用1H-NMR進行了表征。利用辛酸亞錫為主引發(fā)劑，單端生物素化的聚乙二醇的另一端羥基為共引發(fā)劑，催化丙交酯開環(huán)聚合合成了生物素化聚乙二醇-聚乳酸嵌段共聚物(Biotin-PEG-PLA)。該共聚物同樣用1H-NMR進行了表征。利用合成得到的Biotin-PEG-PLA兩親性嵌段共聚物，采用納米沉淀的方法制備了Biotin-PEG-PLA納米粒子。以透射電子顯微鏡和動態(tài)光散射等手段對納米粒子

2、的形貌和粒徑進行了表征。結(jié)果表明：納米粒子呈規(guī)則的球狀，粒度均一且分散性良好，粒徑在100納米以下。 用親和素(Avidin)修飾了納米粒子，利用親和素-生物素體系(Biotin-Avidininteractions)及Avidn存在四個與生物素結(jié)合的活性位點這一特性，構(gòu)建了進一步表面功能化平臺。定量分析了Avidin與納米粒子的連接效率。 用活化生物素同轉(zhuǎn)鐵蛋白(Transferrin，Tf)反應(yīng)制成生物素活化的轉(zhuǎn)鐵蛋

3、白(Biotin-Tf)，將其作為靶向因子對Avidin修飾的Biotin-PEG-PLA納米粒子進行生物功能化。用濃度差減法測量了轉(zhuǎn)鐵蛋白與Avidin修飾的Biotin-PEG-PLA納米粒子的結(jié)合效率，并用蛋白質(zhì)凝膠電泳定性表征。用生物素化的RGD環(huán)狀多肽(Biotin-RGD)作為另一種靶向因子對Avidin修飾的Biotin-PEG-PLA納米粒子進行生物功能化，制備不同靶向功能的納米粒子。用生物素化的RGD環(huán)狀多肽和生物素活

4、化的轉(zhuǎn)鐵蛋白同時對Avidin修飾的Biotin-PEG-PLA納米粒子進行生物雙功能化，制備雙功能化的納米粒子。 以綠色熒光染料Bodipy對納米粒子進行了熒光標記，利用熒光倒置顯微鏡對U251人腦膠質(zhì)瘤細胞吞噬不同表面功能化、雙功能化和未進行修飾的納米粒子的效率進行了研究，研究表明：U251細胞對四種納米粒子均有一定的吞噬效果，而且在6-8h時最為明顯；雙功能化可以一定程度上增強U251細胞對納米粒子的吞噬。流式細胞儀結(jié)果定