孟魯司特對(duì)大鼠神經(jīng)病理性疼痛的拮抗作用及相關(guān)機(jī)理研究.pdf

1、目的：觀察白三烯受體拮抗劑孟魯司特對(duì)CCI大鼠神經(jīng)病理性疼痛的影響及相關(guān)機(jī)制。
　　方法：SD雄性大鼠(250±50g)36只，隨機(jī)分為6組(n=6)：正常對(duì)照組(N)；假手術(shù)組(Sham)；CCI模型組(CCI)；孟魯司特低劑量組(L)；孟魯司特中劑量組(M)；孟魯司特高劑量組(H)。通過(guò)CCI法制備神經(jīng)病理性疼痛模型，孟魯司特低、中、高劑量組大鼠術(shù)后每天分別腹腔注射0.5、1、2 mg/kg的孟魯司特溶液；其余各組分別腹腔注射

2、等體積的溶媒；共給藥14天。各組大鼠在CCI術(shù)前1天，術(shù)后1、3、5、7、14天，分別用VonFrey法和Hargreaves法測(cè)量機(jī)械刺激縮足反射閾值(MWT)和和熱縮足潛伏期(TWL)。采用ELISA法檢測(cè)脊髓L4-6段勻漿液中IL-1β、IL-6以及TNF-α的表達(dá)水平，利用免疫熒光單標(biāo)法檢測(cè)Iba1的表達(dá)，通過(guò)免疫印跡方法檢測(cè)脊髓L4-6勻漿液中磷酸化p38 MAPK和NF-κB p65的表達(dá)，通過(guò)免疫組化技術(shù)檢測(cè)脊髓L4-6段

3、NF-κB p65的表達(dá)，并且利用免疫熒光雙標(biāo)法檢測(cè)Iba1和磷酸化p38、Iba1和NF-κB的表達(dá)情況。
　　結(jié)果：1.孟魯司特對(duì)CCI大鼠機(jī)械刺激縮足反射閾值(MWT)和和熱縮足潛伏期(TWL)的影響各組大鼠在術(shù)前1天MWT和TWL均無(wú)顯著性差異。術(shù)后1天、3天、5天、7天和14天，MWT和TWL值均顯著降低(P<0.05)。而孟魯司特低、中、高劑量均不同程度地抑制了CCI手術(shù)導(dǎo)致的MWT和TWL降低。
　　2.孟魯司

4、特對(duì)CCI大鼠脊髓勻漿液中IL-1β，IL-6和TNF-α水平的影響CCI組大鼠的IL-1β、IL-6以及TNF-α分別為2880.39±1234.61、6606.73±2421.42、2880.39±1234.61(pg/mg tissue)，明顯高于假手術(shù)組(P<0.05)；而孟魯司特低、中、高劑量組的IL-1β，IL-6以及TNF-α的含量均顯著低于CCI組(P<0.05)。
　　3.孟魯司特對(duì)CCI大鼠脊髓背角小膠質(zhì)細(xì)胞I

5、ba1表達(dá)的影響免疫熒光化學(xué)檢測(cè)發(fā)現(xiàn)：與假手術(shù)組相比，CCI模型組大鼠脊髓背角Iba1的表達(dá)顯著增強(qiáng)，小膠質(zhì)細(xì)胞活化的數(shù)量顯著增加，細(xì)胞體積明顯增大；而低、中、高劑量的孟魯司特均不同程度地抑制了脊髓背角小膠質(zhì)細(xì)胞Iba1的表達(dá)和活化。
　　4.免疫印跡檢測(cè)孟魯司特對(duì)CCI大鼠脊髓p38 MAPK磷酸化和NF-κB p65活化的影響免疫印跡結(jié)果顯示：p-p38 MAPK在各組中都有表達(dá)，與假手術(shù)組相比較，CCI組p-p38 MAPK

6、蛋白的表達(dá)明顯增高(P<0.01)；與CCI組比，孟魯司特的低、中、高劑量組p-p38 MAPK蛋白的表達(dá)均顯著降低(P<0.05)，分別為CCI組的66.0％、70.3％、53.3％。另外，細(xì)胞核NF-κB p65蛋白在各組中都有表達(dá)，與假手術(shù)組相比較，CCI組NF-κB p65蛋白在細(xì)胞核中的表達(dá)明顯增高(P<0.01)；與CCI組比，孟魯司特的低、中、高劑量組NF-κB p65蛋白的表達(dá)均顯著降低(均P<0.01)，分別為CCI組

7、的50.5％、41.0％、36.6％。
　　5.免疫組化檢測(cè)孟魯司特對(duì)CCI大鼠脊髓背角NF-κB p65表達(dá)的影響免疫組化染色顯示：NF-κB p65在脊髓胞漿中和胞核中均有表達(dá)，與假手術(shù)組相比，CCI模型組大鼠脊髓細(xì)胞核NF-κB p65的表達(dá)顯著增多，而孟魯司特的低、中、高劑量組NF-κB p65蛋白的核轉(zhuǎn)位均顯著減少。
　　6.孟魯司特對(duì)CCI大鼠脊髓背角小膠質(zhì)細(xì)胞p38 MAPK磷酸化和NF-κB p65活化的影響

8、免疫熒光化學(xué)雙標(biāo)檢測(cè)發(fā)現(xiàn)：CCI手術(shù)后14天，模型組Iba1(紅染)和p-p38 MAPK(綠染)雙陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)量顯著增多，并且Iba1(紅染)和NF-κB p65(綠染)雙陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)量也明顯增多；而孟魯司特的低、中、高劑量組小膠質(zhì)細(xì)胞p38MAPK的磷酸化和NF-κB p65蛋白的表達(dá)均顯著降低。
　　結(jié)論：孟魯司特能夠顯著抑制CCI大鼠脊髓背角小膠質(zhì)細(xì)胞p38 MAPK磷酸化和NF-κB p65活化，減少促炎細(xì)胞因子IL-1β、