滋陰中藥活性成分對(duì)帕金森病模型的保護(hù)作用和機(jī)制研究.pdf

1、帕金森病（Parkinson'sdisease，PD）是一種多發(fā)于中老年人的慢性神經(jīng)退行性變性疾病，主要病理特征為中腦黑質(zhì)致密部多巴胺能神經(jīng)元選擇性丟失。目前抗PD藥物可以改善癥狀，但是缺乏神經(jīng)保護(hù)或神經(jīng)修復(fù)的活性，而這一特性對(duì)疾病修飾（diseasemodifying）作用來說是十分重要的。PD復(fù)雜的病理變化需要我們?nèi)ラ_發(fā)具有多靶點(diǎn)、可以改變病程的神經(jīng)保護(hù)或神經(jīng)修復(fù)的藥物。近年來有關(guān)GDNF、基底核神經(jīng)肽在PD中的作用備受關(guān)注，本課題

2、主要從這兩個(gè)方面分別研究了哈巴俄苷、異菝葜皂苷元對(duì)PD模型的保護(hù)作用。
　　一方面，在前期研究中，我們發(fā)現(xiàn)哈巴俄苷，一種來自于滋陰中藥玄參的環(huán)烯醚萜類小分子化合物，可以預(yù)防和逆轉(zhuǎn)Mpp+引起的原代培養(yǎng)中腦多巴胺能神經(jīng)元變性，并證實(shí)這種作用與上調(diào)模型組膠質(zhì)細(xì)胞源神經(jīng)營養(yǎng)因子(GDNF)mRNA、蛋白水平有關(guān)。本課題在此基礎(chǔ)上，進(jìn)一步在體內(nèi)動(dòng)物模型（慢性MPTP損傷小鼠模型）上對(duì)哈巴俄苷的藥效進(jìn)行了驗(yàn)證。我們發(fā)現(xiàn)，連續(xù)60天灌胃給予哈

3、巴俄苷(2，6，18mg/kg/d)可劑量依賴性地改善模型小鼠的運(yùn)動(dòng)功能（Rotarod行為學(xué)測(cè)試）、增加中腦黑質(zhì)致密部酪氨酸羥化酶陽性(TH+)神經(jīng)元數(shù)目（免疫組化和無偏差立體計(jì)數(shù)）、提高紋狀體多巴胺轉(zhuǎn)運(yùn)體(DAT)密度（125I-FP-CIT放射自顯影測(cè)定）。在機(jī)制研究中，我們發(fā)現(xiàn)哈巴俄苷不能抑制單胺氧化酶-B(MAO-B)的活力，但是它可以提高模型小鼠紋狀體內(nèi)GDNF蛋白水平、可以使模型小鼠紋狀體內(nèi)異常表達(dá)的3種神經(jīng)肽前體(PDY

4、N，PPT-1，PENK)的蛋白水平正?；?。
　　另一方面，大量體內(nèi)外實(shí)驗(yàn)已經(jīng)證實(shí)異菝葜皂苷元(smilagenin，SMI)，一種從滋陰中藥知母中提取的小分子化合物，可以經(jīng)多種機(jī)制如提高GDNF表達(dá)，對(duì)PD模型發(fā)揮神經(jīng)保護(hù)作用，但是關(guān)于它能否調(diào)控基底核回路中神經(jīng)肽的表達(dá)仍未知。首先，我們?cè)诼訫PTP損傷小鼠模型上觀察了SMI對(duì)紋狀體內(nèi)神經(jīng)肽表達(dá)的影響。實(shí)驗(yàn)初我們用Rotarod行為學(xué)測(cè)試、TH+神經(jīng)元染色驗(yàn)證了模型制作的成功以

5、及SMI的保護(hù)作用。ELISA、實(shí)時(shí)定量RT-PCR數(shù)據(jù)顯示，SMI可以改善模型小鼠紋狀體內(nèi)PDYN，PPT-1，PENK的蛋白和mRNA的異常表達(dá)，使3者蛋白水平回歸正常。其次，我們建立了體外腦片培養(yǎng)模型來進(jìn)一步探索相關(guān)調(diào)控機(jī)制。在腦片模型中，Mpp+均可引起腦片中3種神經(jīng)肽前體蛋白水平的降低，而給予SMI預(yù)保護(hù)可以顯著改善PPT-1蛋白的表達(dá)，并且這一作用不受DA受體阻斷劑的影響。
　　綜上所述，我們證實(shí)了哈巴俄苷在PD動(dòng)物模