血清反應(yīng)因子在帕金森病發(fā)病中的作用和機制研究.pdf

1、目的：
　　研究血清反應(yīng)因子在帕金森病發(fā)病中的表達變化及可能存在的保護作用,并探討其作用機制。
　　方法：
　　Lewis大鼠背部皮下，連續(xù)60天注射魚藤酮2.0 mg/kg建立帕金森大鼠模型。在不同時間點，免疫組化以及 Western blot檢測 Lewis大鼠黑質(zhì)區(qū)血清反應(yīng)因子（serum response factor, SRF）、酪氨酸羥化酶（Tyrosine hydroxylase，TH）的表達變化；魚藤酮

2、處理的高分化PC12細胞株，siRNA干擾和質(zhì)粒轉(zhuǎn)染技術(shù)敲減和過表達 SRF，Cell Counting Kit（CCK8）檢測帕金森細胞模型中 SRF敲減和過表達后細胞活性的改變；Western blot檢測魚藤酮細胞模型不同時間點SRF及自噬相關(guān)蛋白P62、LC3-II的水平變化；魚藤酮在Atg5敲減的MEF細胞株上誘導(dǎo)帕金森模型，使用質(zhì)粒轉(zhuǎn)染方法構(gòu)建SRF過表達模型，CCK8方法檢測細胞活性的變化；運用siRNA干擾及質(zhì)粒轉(zhuǎn)染方法

3、敲減和過表達 SRF，Western blot方法檢測魚藤酮細胞模型中SRF、α-synuclein以及自噬相關(guān)指標(biāo)P62、LC3的水平變化；運用ELISA法檢測PD患者及健康人外周血清的SRF含量。
　　結(jié)果：
　　魚藤酮造模組Lewis大鼠黑質(zhì)區(qū)TH和SRF呈時間依賴性下降；魚藤酮 PC12細胞模型中SRF呈時間依賴性下降，LC3-II、P62呈時間依賴性上升。siRNA干擾后能夠抑制SRF的表達。魚藤酮模型中SRF表達

4、抑制后，細胞株對魚藤酮的敏感性增高，α-synuclein、LC3-II、P62表達升高，質(zhì)粒轉(zhuǎn)染過表達 SRF后，細胞對魚藤酮敏感性降低，α-synuclein、P62表達降低，LC3-II表達升高。在Atg5敲除MEF細胞株魚藤酮模型中，SRF過表達后細胞對魚藤酮的敏感性無明顯改變。PD患者外周血清SRF含量低于正常組外周血清中含量。
　　結(jié)論：
　　1、在帕金森動物和細胞模型中均發(fā)現(xiàn)血清反應(yīng)因子SRF含量呈時間依賴性下