不同劑量氯沙坦治療大鼠門脈高壓性結(jié)腸病的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、目的：探討門脈高壓性結(jié)腸病(PHC)的發(fā)病機(jī)制和血管緊張素AT1型受體拮抗劑氯沙坦對(duì)PHC的治療作用及其治療機(jī)制；探索氯沙坦在門脈高壓時(shí)對(duì)結(jié)腸高動(dòng)力循環(huán)血流動(dòng)力學(xué)的改善和對(duì)結(jié)腸黏膜的保護(hù)作用。 方法：取92只成年雄性Wistar大鼠,其中76只大鼠利用復(fù)合因素法制作肝硬化模型,余16只作為正常對(duì)照組,采用普通飲食。8周后取模型鼠8只,正常對(duì)照組大鼠6只,測(cè)量肝靜脈壓力梯度(HVPG)、平均動(dòng)脈壓(MAP)并取肝臟組織行HE染色光

2、鏡下觀察,證實(shí)門脈高壓已經(jīng)形成。將剩余模型大鼠(造模期間死亡23只)隨機(jī)分為模型對(duì)照組(n=12)、高劑量治療組(n=11)、中劑量治療組(n=11)、低劑量治療組(n=11)。各個(gè)治療組氯沙坦分別按10mg/kg/d、5mg/kg/d、2.5mg/kg/d進(jìn)行灌胃。正常對(duì)照組(n=10)、模型對(duì)照組(n=12)以相同體積蒸餾水灌胃。治療期間模型對(duì)照組以及治療組繼續(xù)復(fù)合因素法給藥,治療3周后,所有大鼠測(cè)量HVPG并取結(jié)腸黏膜組織10％甲

3、醛固定,常規(guī)石蠟包埋,HE染色、一氧化氮合酶(NOS)免疫組化染色,并用圖像分析系統(tǒng)進(jìn)行量化。另取結(jié)腸黏膜組織,用2％戊二醛固定兩小時(shí),放入0.1mol/L二甲砷酸鈉緩沖液中,常規(guī)處理后準(zhǔn)備行透射電鏡觀察。抽取門靜脈血離心后取血清,硝酸還原酶法檢測(cè)血清NO代謝產(chǎn)物含量,放免法測(cè)定血清TNF-α水平。 結(jié)果：HVPG測(cè)量結(jié)果：模型對(duì)照組較正常對(duì)照組顯著升高(p<0.01),各個(gè)治療組與模型對(duì)照組相比HVPG均顯著下降(p<0.05

4、),治療組組間差異無(wú)顯著性(p>0.05)。MAP值高劑量治療組與其他各組相比,顯著降低(p<0.05),余四組組間差異不顯著(p>0.05)。HE染色觀察：模型對(duì)照組黏膜下層微靜脈面積、毛細(xì)血管內(nèi)表面面積均明顯高于正常對(duì)照組(p<0.01),鏡下觀察可見(jiàn)部分小靜脈血管壁斷裂,紅細(xì)胞逸散至血管外,黏膜上皮細(xì)胞脫落、壞死、顆粒層可見(jiàn)炎癥細(xì)胞的浸潤(rùn)。各個(gè)治療組上述病理變化均有好轉(zhuǎn),三個(gè)治療組黏膜下層微靜脈面積、毛細(xì)血管內(nèi)表面面積均低于模型對(duì)

5、照組,其中微靜脈面積三個(gè)治療組與模型對(duì)照組相比差異均具有顯著性(p<0.01)。毛細(xì)血管內(nèi)表面面積高、中劑量治療組與模型對(duì)照組相比差異具有顯著性(p<0.05)。電鏡觀察結(jié)果：模型對(duì)照組腺上皮細(xì)胞微絨毛斷裂、脫落,細(xì)胞內(nèi)內(nèi)質(zhì)網(wǎng)腫脹,核糖體脫落,線粒體腫脹,嵴斷裂。血管內(nèi)皮細(xì)胞內(nèi)可見(jiàn)肌微絲、吸收小泡增多。高劑量治療組腺上皮細(xì)胞微絨毛排列較模型對(duì)照組整齊,斷裂少見(jiàn),細(xì)胞內(nèi)細(xì)胞器病變明顯減輕。血管內(nèi)皮細(xì)胞吞飲小泡、肌微絲減少。免疫組化結(jié)果：與

6、正常對(duì)照組相比,iNOS在模型對(duì)照組黏膜層及黏膜下層血管內(nèi)皮細(xì)胞表達(dá)顯著增強(qiáng)(p<0.01)。與模型對(duì)照組相比,各個(gè)治療組iNOS在血管內(nèi)皮細(xì)胞表達(dá)均有一定程度的下降,高劑量治療組表達(dá)下調(diào)具有顯著性(p<0.05),但各個(gè)治療組組間比較差異不顯著(p>0.05)。eNOS集中表達(dá)于血管內(nèi)皮細(xì)胞,模型對(duì)照組、各個(gè)治療組間差異無(wú)顯著性(p>0.05),但4組均明顯高于正常對(duì)照組(p<0.05)。血清TNF-α水平：模型對(duì)照組血清TNF-α顯

7、著高于正常對(duì)照組(p<0.01),各治療組血清TNF-α水平均低于模型對(duì)照組,高中劑量治療組與模型對(duì)照組相比差異具有顯著性(p<0.05),低劑量治療組與模型對(duì)照組相比差異無(wú)顯著性(p>0.05)。血清NO水平：模型對(duì)照組顯著高于正常對(duì)照組(p<0.01),與模型對(duì)照組相比,高、低劑量治療組均有一定程度的降低,但差異不具有顯著性(p>0.05),中劑量治療組則顯著降低(p<0.05)。 結(jié)論：門脈高壓導(dǎo)致結(jié)腸管壁血液淤滯；血管在