VARS2和FGFR2基因單核苷酸多態(tài)性與乳腺癌易感性及FGFR2基因剪接相關研究.pdf

1、乳腺癌是世界范圍內女性最常見的惡性腫瘤之一，其發(fā)病率在不斷上升。在美國等發(fā)達國家，其發(fā)病率占女性惡性腫瘤的30-32％，占女性惡性腫瘤之首。在我國的部分發(fā)達省市，乳腺癌的發(fā)病率也已躍居第一位。乳腺癌是嚴重威脅女性身心健康的疾病。乳腺癌的發(fā)生發(fā)展是多階段多基因參與的事件，在正常乳腺上皮轉化為惡性乳腺癌的過程中，多個基因發(fā)生了有序的改變。乳腺癌是環(huán)境因素和遺傳因素共同作用的結果，在相同的致癌因素作用下，只有小部分人發(fā)生乳腺癌，提示遺傳背景的

2、差異導致個體對乳腺癌易感性的不同。目前研究較多的與乳腺癌易感性相關的基因有BRCA1和BRCA2基因，研究顯示BRCA突變基因攜帶者在任何年齡發(fā)生乳腺癌的危險性都比非攜帶者大。但BRCA基因突變所引起乳腺癌的比例大約只占5％～10％，這說明還存在其他的與乳腺癌相關的易感基因。近年來，全基因組關聯研究(GWAS)為研究那些低外顯率高變異頻率的易感位點提供了良好的技術支持。通過研究發(fā)現了大量的和乳腺癌相關的易感基因和單核苷酸多態(tài)性位點，例如

3、FGFR2、LSP1、MAP3K1、TGFB1、TOX3等。VARS2基因即位于人類HLA基因區(qū)，它的主要功能為編碼ValRS合成。國外有研究推測此基因與肺癌及一些自身免疫性疾病有一定關系，也有報道認為此基因的變異和早期乳腺癌的預后有一定相關性。成纖維細胞生長因子受體2(FGFR2)是酪氨酸激酶受體家族的成員之一，它的主要作用是介導FGFs信號傳導，在細胞的增殖、分化、血管生成、骨骼發(fā)育以及人體的生長發(fā)育相關過程中發(fā)揮重要的作用。FGF

4、R2已經被證實和許多疾病相關，尤其FGFR2與腫瘤的關系成為近年來研究的熱點。GWAS已經證實FGFR2基因是乳腺癌易感基因之一，尤其是它的第2個內含子中存在8個SNP位點rs35054928，rs2981578，rs2912778, rs2912781, rs35393331, rs10736303, rs7895676, rs33971856，已經證實與增加乳腺癌的風險高度相關。此外，FGFR2基因的選擇性剪接也成為近年來的研究熱點

5、。其中FGFR2ⅢB和FGFR2ⅢC是其中最重要的兩種剪接變異體，FGFR2基因的第三個免疫球蛋白樣區(qū)域的互相排斥的選擇性剪接產生了FGFRⅢB受體或者FGFR2ⅢC受體。國外已有研究報道在膀胱癌中發(fā)現FGFR2ⅢB向FGFR2ⅢC亞型的轉化，并且認為這種轉化與癌腫的浸潤能力增強有關;也有學者在轉移性乳腺癌中發(fā)現了FGFR2ⅢC比FGFR2ⅢB的表達量高。因此我們推測FGFR2ⅢB和FGFR2ⅢC的表達與乳腺癌的進展有關。本研究主要分為

6、三個部分：
　　 第一部分：VARS2和FGFR2基因單核苷酸多態(tài)性與中國女性乳腺癌易感性的研究。
　　 目的：探討VARS2（valyl-tRNA synthetase2）基因中單核苷酸多態(tài)性位點(single nucleotide polymorphisms，SNP) rs2249464與廣東省漢族女性散發(fā)性乳腺癌的相關性。
　　 方法：采用MassARRAY(@)-IPLEX SNP分型技術，以南方醫(yī)科大學

7、南方醫(yī)院的216例廣東漢族乳腺癌患者及216例同期健康體檢者為研究對象，對rs2249464多態(tài)性位點進行基因分型，利用x2檢驗統(tǒng)計分析病例組和對照組的基因型頻率有無差異，利用非條件Logistic回歸計算比數比(odds ratio，OR)和95％可信區(qū)間(confidence interval，CI)來評價此位點多態(tài)性與乳腺癌的相關性。然后進一步將病例組按雌激素受體(estrogen receptor, ER)和孕激素受體(prog

8、esteronereceptor, PR)免疫組化結果行分層分析。
　　 結果：rs2249464位點C/C，C/T，T/T3種基因型分布在對照組和病例組之間有統(tǒng)計學差異。根據免疫組化情況進一步分層分析結果表明rs2249464的基因型分布在ER陽性/陰性組之間的差異無統(tǒng)計學意義(P＞0.05);但在PR陽性/陰性組之間的差異有統(tǒng)計學意義(P＜0.05）。
　　 結論：VARS2基因rs2249464位點單核苷酸多態(tài)性與

9、廣東漢族散發(fā)性乳腺癌的易感性具有相關性，且攜帶T/T基因型的患者更容易罹患PR陰性乳腺癌。
　　 第二部分：FGFR2基因單核苷酸多態(tài)性與中國女性乳腺癌易感性的研究。
　　 目的：探討FGFR2基因中5個單核苷酸多態(tài)性位點（Rs1078806、Rs2420946、Rs2981579、Rs7895676和Rs1219648）與中國女性散發(fā)性乳腺癌的相關性。
　　 方法：采用MassARRAY(@)-IPLEX SN

10、P分型技術，分別收集來自廣東、江西、山東、重慶四個地區(qū)845例乳腺癌患者及同期健康體檢的882例正常人的血清為研究對象，對Rs1078806、Rs2420946、Rs2981579、Rs7895676和Rs1219648多態(tài)性位點進行基因分型，利用x2檢驗統(tǒng)計分析病例組和對照組的基因型頻率有無差異，利用非條件Logistic回歸計算比數比(odds ratio，OR)和95％可信區(qū)間(confidence interval，CI)來評價

11、此位點多態(tài)性與乳腺癌的相關性。然后進一步將病例組按雌激素受體(estrogen receptor, ER)和孕激素受體(progesterone receptor,PR)免疫組化結果行分層分析。
　　 結果：⑴Rs1078806位點C/C，C/T，T/T3種基因型分布在對照組和病例組之間沒有統(tǒng)計學差異。根據免疫組化情況進一步分層分析結果表明Rs1078806的基因型分布在ER陽性/陰性組之間的差異無統(tǒng)計學意義(P＞0.05);但

12、在PR陽性/陰性組之間的差異有統(tǒng)計學意義（P＜0.05）。⑵Rs2420946位點C/C，C/T，T/T3種基因型分布在對照組和病例組之間有統(tǒng)計學差異。根據免疫組化情況進一步分層分析結果表明Rs2420946的基因型分布在ER陽性/陰性組之間的差異有統(tǒng)計學意義(P＜0.05）;并且在PR陽性/陰性組之間的差異有統(tǒng)計學意義(P＜0.05）。⑶Rs2981579位點C/C，C/T，T/T3種基因型分布在對照組和病例組之間有統(tǒng)計學差異。根據免

13、疫組化情況進一步分層分析結果表明Rs2981579的基因型分布在ER陽性/陰性組之間的差異有統(tǒng)計學意義(P＜0.05）;并且在PR陽性/陰性組之間的差異有統(tǒng)計學意義（P＜0.05）。⑷Rs7895676和Rs1219648兩位點經分析后發(fā)現Hardy-Weinberg不平衡(P＜0.05）。
　　 結論：①FGFR2基因Rs2420946和Rs2981579位點單核苷酸多態(tài)性與女性乳腺癌的具有相關性，其中在Rs2420946和R

14、s2981579兩個位點中攜帶T/T基因型的人群患乳腺癌的風險增加。②Rs1078806位點的單核苷酸多態(tài)性和孕激素受體的狀態(tài)相關。③Rs2420946和Rs2981579 T/T基因型攜帶的乳腺癌患者的激素受體狀態(tài)更容易為陽性。
　　 第三部分：FGFR2基因剪接體亞型與乳腺癌的相關研究。
　　 目的：探討FGFR2基因剪接變異體與乳腺癌的關系，及FGFR2基因剪接變異體與臨床病理資料之間的相關性。
　　 方法

15、：收集來自南方醫(yī)院乳腺科的35例乳腺癌患者的癌組織和癌旁組織。利用限制性內切酶技術，用限制性內切酶AVAI和ECORV剪切FGFR2基因片段（外顯子6-9）區(qū)分FGFR2ⅢB和FGFR2ⅢC的表達，經瓊脂糖凝膠電泳后在紫外透射儀下觀察FGFR2ⅢB和FGFR2ⅢC的表達;之后利用熒光定量PCR的方法測定FGFR2ⅢB亞型和FGFR2ⅢC亞型的mRNA的絕對定量，用非參數檢驗的方法分析FGFR2ⅢB和FGFR2ⅢC mRNA的表達在乳腺癌

16、組織和正常組織中的差異，并根據臨床病理資料進一步分析FGFR2ⅢB和FGFR2ⅢC mRNA表達在不同分組中的差異。
　　 結果：⑴FGFR2ⅢB基因經AVAI酶切后產生2個片段（70bp和230bp），FGFR2ⅢC基因經ECORV酶切后產生2個片段(180bp和120bp)，在15例乳腺癌標本中15例有FGFR2ⅢB表達，7例乳腺癌標本中有FGFR2ⅢC表達。⑵FGFR2ⅢB、FGFR2ⅢC分別在癌組織和癌旁組織中的表達無顯

17、著差異(P＞0.05);在癌組織和癌旁組織中FGFR2ⅢB和FGFR2ⅢC的表達有顯著差異，癌組織和癌旁組織中的FGFRⅢB均的表達量顯著高于FGFR2ⅢC(P＜0.05)；⑶癌癥組中FGFR2ⅢB、FGFR2ⅢC各自的表達量在不同年齡組中有顯著差異，在年齡＜50組中FGFR2ⅢB及FGFR2ⅢC的表達量均明顯大于年齡＞50組的乳腺癌患者(P＜0.05);而癌癥組中FGFR2ⅢB和FGFR2ⅢC表達差異在不同年齡組中無明顯差異(P＞0.

18、05)；⑷癌癥組中FGFR2ⅢB、FGFR2ⅢC各自的表達量在不同臨床分期分組中有顯著差異，在臨床分期為Ⅲ和Ⅳ組中FGFR2ⅢB及FGFR2ⅢC的表達量均明顯大于臨床分期為0、Ⅰ和Ⅲ期組的乳腺癌患者(P＜0.05);而癌癥組中FGFR2ⅢB和FGFR2ⅢC表達差異在不同臨床分期分組中無明顯差異(P＞0.05)。⑸癌癥組中FGFR2ⅢB和FGFR2ⅢC各自表達量在不同淋巴結轉移分組間無統(tǒng)計學差異(P＞0.05);癌癥組中FGFR2ⅢB和F

19、GFR2ⅢC之間表達量在不同淋巴結轉移分組中無明顯差異(P＞0.05)。⑹癌癥組中的FGFR2ⅢB和FGFR2ⅢC各自的表達量，以及FGFR2ⅢB和FGFR2ⅢC的表達差異在不同ER、PR、HER2、分子分型分組中無明顯差異(P＞0.05)。
　　 結論：①FGFR2基因剪接體的亞型在乳腺癌中的表達有顯著差異，其中更多表達FGFR2ⅢB。②癌組織中FGFR2ⅢB和FGFR2ⅢC的表達在年齡較小的乳腺癌患者中表達更高。③癌組織中F