與胚胎心肌共培養(yǎng)通過Cx43影響ESC源細(xì)胞間信號(hào)傳導(dǎo)的研究.pdf

1、背景:心血管疾病是一類嚴(yán)重威脅人類健康、危及人類生命的疾病。近年來干細(xì)胞移植療法治療缺血性心肌病成為研究的熱點(diǎn)。許多種干細(xì)胞或干細(xì)胞分化而來的細(xì)胞都可作為移植的種子細(xì)胞。盡管移植細(xì)胞后心肌功能有所改善,但移植細(xì)胞的存活率極低,及與宿主細(xì)胞間整合不良,可能導(dǎo)致移植后心律失常的發(fā)生,遠(yuǎn)期預(yù)后不佳。這仍是一個(gè)有待解決的重要問題。
　　目的:研究小鼠胚胎心室肌細(xì)胞與小鼠胚胎干細(xì)胞之間的相互作用以及共培養(yǎng)對小鼠胚胎干細(xì)胞分化細(xì)胞間的縫隙連接

2、形成、分布、功能方面的影響。
　　方法:本實(shí)驗(yàn)中,我們采用經(jīng)典的懸滴—懸浮—貼壁法共培養(yǎng)小鼠胚胎干細(xì)胞(mES)與小鼠胚胎心室肌細(xì)胞(mEVs),在共培養(yǎng)期間顯微鏡下觀察細(xì)胞生長情況、擬胚體(EBs)形態(tài)以及EBs的跳動(dòng)情況;劃痕負(fù)載染料遷移實(shí)驗(yàn)(SLDT)檢測細(xì)胞間縫隙連接傳導(dǎo)功能;從mRNA及蛋白水平研究心肌及縫隙連接相關(guān)基因的表達(dá)。免疫熒光染色確定連接蛋白的分布情況。從而研究細(xì)胞間相互作用以及mES分化而來的心肌細(xì)胞的功能。

3、
　　結(jié)果:⑴在mEVs與mES細(xì)胞的共培養(yǎng)體系中,mES形成的擬胚體自發(fā)搏動(dòng)的比率在分化中期較對照組明顯增加;⑵共培養(yǎng)組與對照組間心肌標(biāo)志物cTNT在mRNA水平上無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異;⑶劃痕實(shí)驗(yàn)顯示共培養(yǎng)組中熒光黃染料在單位時(shí)間內(nèi)沿劃痕向兩側(cè)遷移距離較對照組遠(yuǎn),說明共培養(yǎng)組細(xì)胞間縫隙連接傳導(dǎo)作用增強(qiáng);⑷分化中期,共培養(yǎng)組的連接蛋白Connexin43(Cx43)mRNA水平及總蛋白水平均較對照組有明顯升高;⑸免疫熒光染色提示共培養(yǎng)組細(xì)