CpG ODN對樹突狀細(xì)胞及其分泌的exosomes抗腫瘤免疫的影響.pdf

1、鄭州大學(xué)碩士學(xué)位論文CpGODN對樹突狀細(xì)胞及其分泌的exosomes抗腫瘤免疫的影響姓名：顧巧麗申請學(xué)位級別：碩士專業(yè)：病理學(xué)與病理生理學(xué)指導(dǎo)教師：董子明20060520鄭州大學(xué)碩上研究生畢業(yè)論立cpGoDN對樹突狀細(xì)胞及其分泌的exosomes抗腫瘤免疫的影響果具有提高作用的CpGODN。方法采取健康人臍血，等量PBs稀釋。標(biāo)本使用淋巴細(xì)胞分離液進(jìn)行密度梯度離心，獲得單個核細(xì)胞。在含有10％胎牛血清的RPMI—1640培養(yǎng)基中(rh

2、GM—CSF，mIL一4)誘導(dǎo)樹突狀細(xì)胞，置于37℃，5％c02飽和濕度的培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。第5d用食管癌Ecal09細(xì)胞凍融抗原致敏Dc，第8d分別加上不同序列的cpGODN作為刺激物，對照組加上等量的PBS。分別收集第7d和第12d未粘附細(xì)胞，進(jìn)行相關(guān)檢測。1相差顯微鏡下觀察細(xì)胞形態(tài)。2流式細(xì)胞儀檢測第7d和第12d樹突狀細(xì)胞表面HLADR，CD86，CD5分子表達(dá)。3通過一系列高速離心提取Dcs的亞細(xì)胞結(jié)構(gòu)exosomes。利用透射電

3、鏡觀察cxosomes的形態(tài)。4四甲基偶氮嘩藍(lán)(MTT)法分別檢測Dcs以及exosomes誘導(dǎo)的cTL對Ecal09細(xì)胞的殺傷作用。統(tǒng)計學(xué)分析結(jié)果采用xs表示，單因素方差分析，用SPssl3O軟件檢驗，d=005為顯著性水準(zhǔn)。結(jié)果1相差顯微鏡下，貼壁的單個核細(xì)胞加入GMcsF和IL一4培養(yǎng)24h后，細(xì)胞聚集成團(tuán)狀，出現(xiàn)少量的懸浮細(xì)胞；培養(yǎng)72h后，發(fā)現(xiàn)懸浮細(xì)胞增多，體積增大；第6d可見更多的懸浮細(xì)胞；第9d可見多數(shù)細(xì)胞懸浮，形態(tài)變圓，