人牙周炎癥組織中干-祖細胞的體外分離、純化及初步鑒定.pdf

1、牙周組織工程是使牙周組織缺損得到再生性修復的較理想和具有實用前景的方法，合理選擇種子細胞是其獲得成功的關鍵。目前牙周組織工程的種子細胞多選用干細胞，其來源多為健康的人體組織，通常存在取材有創(chuàng)、來源有限等弊端，在一定程度上限制了其應用于臨床治療的可行性。
　　現(xiàn)階段，治療中、重度牙周炎最常用、最有效的方法仍是牙周手術，術中必不可少的一步就是盡可能地去除所有炎癥肉芽、徹底清創(chuàng)。牙周炎癥組織中，修復和破壞過程是共同存在并可互相轉化的。肉

2、芽組織的轉歸除了疤痕，還可能是再生組織，而組織再生離不開間充質(zhì)干細胞?，F(xiàn)已有實驗分別在增生性齦炎的炎癥牙齦組織和不可逆性牙髓炎患牙的炎癥牙髓組織中發(fā)現(xiàn)了間充質(zhì)干細胞，提示我們在炎癥組織應該存在干細胞。另有研究發(fā)現(xiàn)，從牙周炎患牙的肉芽組織中能提取一種可向神經(jīng)細胞分化的細胞，這進一步提示我們，牙周炎癥肉芽組織中可能存在具多向分化能力的細胞。而牙周組織破壞發(fā)生后，殘留牙周膜比健康牙周膜中聚集了更多的具有干細胞特性的細胞，這些細胞很可能會在牙周

3、手術中與肉芽組織一同被刮除。因此，能否在牙周手術中就地取材，從牙周炎癥組織中獲得種子細胞成為我們的關注點。本研究首次從牙周炎癥組織中分離干細胞，并對其可能存在的干細胞特性進行了探討。
　　研究目的：從人牙周炎癥肉芽組織中分離培養(yǎng)出原代細胞，并對其生物學特性和體外誘導分化能力等進行初步的生物學鑒定，期待能為其成為牙周組織工程的種子細胞提供依據(jù)。
　　研究方法：
　　1、從牙周炎患者拔除的患牙根中1/3或根分叉處粘連肉芽組

4、織取材，采用酶消化組織塊法行細胞原代培養(yǎng)，經(jīng)有限稀釋法進行細胞純化。同時分別取材因阻生或正畸需要而拔除的健康第三磨牙或前磨牙牙根中1/3部牙周膜、健康人骨髓，原代培養(yǎng)并純化牙周膜干細胞和骨髓間充質(zhì)干細胞作為對照。取第4代細胞進行后續(xù)實驗。
　　2、對三種細胞用MTT法繪制生長曲線，使用流式細胞儀檢測細胞周期，將細胞接種平皿培養(yǎng)10天測定其克隆形成率，使用免疫熒光染色檢測波形絲蛋白、CD146和STRO-1的表達。
　　3、將

5、三種細胞按一定密度分別均勻接種于24孔板，24h后分別換為成骨誘導液和成脂誘導液，常規(guī)換液，培養(yǎng)30d。分別行茜素紅和油紅O染色，觀察礦化結節(jié)和脂滴形成情況。
　　研究結果：
　　1、從人牙周炎癥組織中分離的原代細胞貼壁生長，經(jīng)純化后細胞體積略小，多呈短梭形，形態(tài)上與健康人牙周膜干細胞和骨髓間充質(zhì)干細胞相比無明顯差異。
　　2、牙周炎癥組織來源細胞的生長曲線呈倒“S”形，生長速度、細胞周期分析S期細胞百分比和克隆形成率

6、低于健康牙周膜干細胞，高于骨髓間充質(zhì)干細胞；波形絲蛋白、CD146和STRO-1均有陽性表達。
　　3、牙周炎癥組織來源細胞經(jīng)成骨誘導和成脂誘導后，分別有礦化結節(jié)和脂滴形成，其成骨和成脂能力與健康牙周膜干細胞相當，明顯低于骨髓間充質(zhì)干細胞。
　　結論：該實驗初步證實了人牙周炎癥組織中存在有干/祖細胞，具有間充質(zhì)干細胞的一般特點，但與正常牙周膜干細胞和骨髓間充質(zhì)干細胞又存在異質(zhì)性。但其細胞類型是否為牙周膜干細胞，是否具有較強的