人角膜緣上皮細(xì)胞體外分離、純化、建系及在板層生物角膜構(gòu)建中初步應(yīng)用的研究.pdf_第1頁
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文檔簡介

1、目的:探討人角膜緣上皮細(xì)胞(corneal limbal epithelial cells,CLECs)體外分離、純化、建系的條件;探討結(jié)合異種角膜基質(zhì)板層,借助旋轉(zhuǎn)培養(yǎng)形成的氣液界面,進(jìn)行板層生物角膜構(gòu)建的可行性.結(jié)論:1.采用消化法、組織塊培養(yǎng)法、飼養(yǎng)層培養(yǎng)法培養(yǎng)原代CLECs增殖能力強(qiáng),分化程度低,其中組織塊培養(yǎng)法和飼養(yǎng)層培養(yǎng)法更有利于細(xì)胞增殖活性的保持.2.三種分離CLSCs的方法中,以Ⅳ型膠原差異粘附法分離效果最好,細(xì)胞活性最

2、高.密度梯度離心法在分離非活性細(xì)胞有一定優(yōu)勢,采用密度梯度在1.013~1.068g/ml的分離溶液,可分離得到CLSCs,但是分離得到的CLSCs純度不高,細(xì)胞活性稍差;熒光激活細(xì)胞分離法的分離效果最差,回收率最低,細(xì)胞容易污染,死亡.3.原代CLECs在體外成功傳到38代后,細(xì)胞仍保持較高的增殖能力和表達(dá)角膜上皮細(xì)胞的特異性蛋白(CK3/12),細(xì)胞無成瘤性.但是細(xì)胞的染色體數(shù)目和核型發(fā)生了變化.4.第15代CLECs在旋轉(zhuǎn)培養(yǎng)形成

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