海洋生物Ⅰ號(hào)中抗腫瘤活性成分的分離純化及初步鑒定.pdf

1、【目的】提取、分離純化海洋生物Ⅰ號(hào)抗腫瘤活性成分，對(duì)海洋生物Ⅰ號(hào)抗腫瘤活性成分的化學(xué)性質(zhì)進(jìn)行初步鑒定。 【方法】采用乙醇冷浸漬法提取海洋生物Ⅰ號(hào)，旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)濃縮得到乙醇粗提取物。石油醚Ⅱ、乙酸乙酯系統(tǒng)溶劑法分離乙醇粗提物。薄層色譜法摸索分離抗腫瘤活性組分乙酸乙酯提取物的硅膠柱層析條件，采用硅膠柱層析法對(duì)該提取物進(jìn)行純化。用MTT法、細(xì)胞生長曲線和細(xì)胞克隆形成實(shí)驗(yàn)篩選提取分離物的抗腫瘤細(xì)胞生長活性。利用薄層色譜法、化學(xué)反應(yīng)，結(jié)合紅外

2、光譜、紫外光譜、質(zhì)譜對(duì)從海洋生物Ⅰ號(hào)分離的抗腫瘤活性成份進(jìn)行化學(xué)性質(zhì)分析鑒定。正交設(shè)計(jì)優(yōu)化海洋生物Ⅰ號(hào)乙酸乙酯的提取工藝。 【結(jié)果】新鮮海洋生物I號(hào)經(jīng)乙醇冷浸漬法和乙酸乙酯系統(tǒng)溶劑法提取后得到乙酸乙酯提取物。乙酸乙酯提取物經(jīng)氯仿：乙酸乙酯：甲醇：水(10∶8∶2:0.5)薄層展開和硅膠柱層析梯度沈脫分離獲得A、B、C、D、E共5個(gè)組分。采用MTT法、細(xì)胞生長曲線和細(xì)胞克隆形成實(shí)驗(yàn)檢測(cè)乙酸乙酯提取物5個(gè)組分對(duì)人低分化鼻咽癌細(xì)胞 C

3、NE-2Z、人肝癌細(xì)胞 Bel-7402、人卵巢癌細(xì)胞HO-8910PM 三種惡性腫瘤細(xì)胞的生長活抑制作用，結(jié)果顯示乙酸乙酯提取物 E組分對(duì)三種腫瘤細(xì)胞均有顯著的抑制作用，抑制率呈明顯量效和時(shí)效關(guān)系。而C組分也有較明顯的抑制作用，但A、B、D組分無明顯作用，表明海洋生物Ⅰ號(hào)的抗腫瘤活性成份主要存在E組分中。用薄層色譜法和硅膠柱層析法進(jìn)一步分離乙酸乙酯提取物E組分，得到E-1、E-2共兩個(gè)組分?？鼓[瘤活性篩選顯示抗腫瘤活性成份主要存在E-

4、1組分中。薄層層析、化學(xué)試管反應(yīng)檢測(cè)乙酸乙酯 E組分存在肽類物質(zhì)，沒有檢測(cè)到甾體、萜類、生物堿、黃酮、有機(jī)酸、酚類、醌類、糖或多糖等化合物；紅外光譜對(duì)E組分分析，提示里面含有-NH<,2>鍵、酰胺鍵、肽鍵、-CH 鍵、-C=C-等。紫外光譜提示E組分在260nm～280nm 有紫外吸收，可能含有氨基酸；質(zhì)譜檢測(cè)E-1組分的相對(duì)分子量是305。正交設(shè)計(jì)優(yōu)化海洋生物Ⅰ號(hào)乙酸乙酯提取條件顯示，最佳提取工藝為：溫度60℃，提取2次，液料比為1∶

5、5。 【結(jié)論】(1)用乙醇冷浸漬法、系統(tǒng)溶劑法和正相硅膠柱層析法可以從海洋生物Ⅰ號(hào)中提取與分離出抗腫瘤活性成份。通過方法和條件的改進(jìn)可提高提取效率；(2)通過MTT法、細(xì)胞生長曲線法和細(xì)胞克隆形成實(shí)驗(yàn)對(duì)海洋生物Ⅰ號(hào)進(jìn)行抗腫瘤活性成份篩選，顯示抗腫瘤活性成份主要存在乙酸乙酯 E、E-1組分中；(3)通過薄層層析及試管化學(xué)反應(yīng)法、紫外和紅外光譜分析、質(zhì)譜檢測(cè)，初步推斷從海洋生物Ⅰ號(hào)抗腫瘤活性成份可能是分子量為300左右的寡肽類物質(zhì)。