三種結(jié)締組織體外誘導(dǎo)胎兒骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞分化的實驗研究.pdf

1、骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞(Bone marrow-derived mesenchymalstem cells，BMSCs)具有易于獲取，高度的自我更新能力，體外能大量擴(kuò)增，可跨胚層分化為三個胚層來源的細(xì)胞等特點，因而被廣泛應(yīng)用于組織工程、再生醫(yī)學(xué)及臨床多種疾病的細(xì)胞移植治療。BMSCs在體外能被誘導(dǎo)分化為上皮細(xì)胞，將體外培養(yǎng)的BMSCs移植到堿燒傷的兔角膜表面后，發(fā)現(xiàn) BMSCs 能向角膜基質(zhì)遷移并向角膜上皮細(xì)胞分化，表明體內(nèi)局部微環(huán)境也可誘導(dǎo)

2、BMSCs分化成與微環(huán)境功能相適應(yīng)的細(xì)胞，但其機(jī)理尚不十分清楚。課題組已有實驗表明胎兒腸壁結(jié)締組織能在體外誘導(dǎo)BMSCs分化為上皮細(xì)胞，本實驗擬比較羊膜、胎兒腸系膜及腸粘膜下層的結(jié)締組織在體外誘導(dǎo)BMSCs分化為上皮細(xì)胞的作用差異，從而為進(jìn)一步研究局部微環(huán)境誘導(dǎo)BMSCs分化的機(jī)制及其在組織工程中的應(yīng)用，提供理論基礎(chǔ)和實驗依據(jù)。 本文收集4～5個月引產(chǎn)胎兒的骨髓細(xì)胞，以全骨髓直接貼壁法和密度離心貼壁法分離、培養(yǎng)、擴(kuò)增BMSCs，

3、比較兩種方法獲取BMSCs的數(shù)量。實驗觀察了不同濃度DAPI對P3 BMSCs的標(biāo)記，并比較了其與凍存復(fù)蘇P3 BMSCs的DAPI標(biāo)記率。將50μl(4×10<'6>個/ml)DAPI標(biāo)記的P3 BMSCs種植于三種結(jié)締組織上誘導(dǎo)培養(yǎng)，另設(shè)同時加EGF和IGF-1的對照組，以及細(xì)胞爬片對照組。液面下培養(yǎng)7d后，升至液一氣平面培養(yǎng)。 各組誘導(dǎo)培養(yǎng)12d后的冰凍切片和鋪片經(jīng)免疫熒光染色。 文中通過實驗研究得出結(jié)論：1.全骨髓直接貼

4、壁法分離擴(kuò)增獲取的BMSCs數(shù)多于密度離心貼壁法。2.DAPI標(biāo)記BMSCs最佳終濃度是40ug/ml標(biāo)記2h。3.EGF和IGF-1 在體外均有誘導(dǎo)BMSCs向上皮細(xì)胞分化的作用；兩者有協(xié)同作用，以30 ng/mlEGF 和50 ng/ml IGF-1 聯(lián)合的協(xié)同作用最強(qiáng)。IGF-1可能有誘導(dǎo)BMSCs向神經(jīng)細(xì)胞分化的作用。4.腸粘膜下層、腸系膜和羊膜的結(jié)締組織均能誘導(dǎo) BMSCs 向上皮細(xì)胞分化，羊膜單獨誘導(dǎo)作用最強(qiáng)；三種結(jié)締組織中