TNFSF4和TNFRSF4基因多態(tài)性與山東漢族人群冠狀動(dòng)脈粥樣硬化疾病的相關(guān)性研究.pdf

1、[研究背景]：
　　 諸多研究表明冠狀動(dòng)脈粥樣硬化心臟病是一種炎癥性疾病。在炎癥發(fā)生發(fā)展過程中，激活的CD4+及CD8+T細(xì)胞發(fā)揮著重要作用，而它們的激活需要各種信號(hào)通路的共刺激作用：其中除主刺激信號(hào)MHC-抗原肽及B7-CD28形成的雙信號(hào)通路途徑作用之外，輔助信號(hào)通路途徑也是T細(xì)胞激活過程中必不可少的條件之一。腫瘤壞死因子超家族成員(TNFSF)和腫瘤壞死因子受體超家族成員(TNPRSF)之間能夠形成T細(xì)胞激活所必須的各種輔

2、助信號(hào)通路，如CD40/CD40L，OX40/OX40L,4-1BB/4-1BBL,CD7O/CD27和TLIA/DR3等。
　　 通過多個(gè)人群中的關(guān)聯(lián)分析及基因差異表達(dá)研究表明，OX40/OX40L信號(hào)通路在冠狀動(dòng)脈粥樣硬化心臟病的發(fā)生發(fā)展過程中具有重要作用。遺傳學(xué)研究及功能研究提示人類的TNFSF4基因(編碼OX40L)及TNFRSF4基因(編碼OX40)很可能作為重要的冠狀動(dòng)脈粥樣硬化心臟病易感基因在疾病發(fā)生中起作用。由于

3、基因中多態(tài)位點(diǎn)與復(fù)雜疾病的關(guān)聯(lián)具有人群特異性，目前在山東漢族人群內(nèi)尚未對(duì)TNFSF4基因及TNFRSF4基因多態(tài)位點(diǎn)與冠狀動(dòng)脈粥樣硬化心臟病的相關(guān)性進(jìn)行研究。
　　 [研究目的]：
　　 利用病例一對(duì)照關(guān)聯(lián)分析研究方法探討TNFSF4基因內(nèi)的5個(gè)單核苷酸多態(tài)位點(diǎn)( SNPs)及TNFRSF4基因內(nèi)的1個(gè)SNP與山東漢族人群冠狀動(dòng)脈粥樣硬化心臟病之間的相關(guān)性，這些多態(tài)位點(diǎn)分別是：TNFSF4基因啟動(dòng)子區(qū)域2個(gè)SNPsrs1

4、234314和rs45454293，第一內(nèi)含子區(qū)域的2個(gè)tag SNPs rs3850641和rs1234313，第二內(nèi)含子區(qū)域的1個(gè)tag SNP rs3861950；TNFRSF4基因第五內(nèi)含子內(nèi)的1個(gè)與功能位點(diǎn)rs2298211處于完美連鎖不平衡的代理SNP位點(diǎn)rs2298212。
　　 [研究方法]：
　　 1.病例組與對(duì)照組樣本收集：在山東漢族人群中收集冠狀動(dòng)脈粥樣硬化心臟病患者及正常對(duì)照，抽取外周血并提取基因

5、組DNA。所收集的冠狀動(dòng)脈粥樣硬化心臟病患者均符合冠狀動(dòng)脈疾病的診斷標(biāo)準(zhǔn)，并行冠脈造影鑒定；正常對(duì)照均為漢族且無親緣關(guān)系、至少三代以內(nèi)居住在山東的健康體檢人群的隨機(jī)個(gè)體，并通過病史、查體、心電圖和胸片排除器質(zhì)性心臟病。
　　 2.基因分型，基因型及等位基因頻率統(tǒng)計(jì)：采用聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)-限制性片段長度多態(tài)(PCR-RFLP)的方法在病例組與對(duì)照組所有個(gè)體中對(duì)各個(gè)多態(tài)位點(diǎn)進(jìn)行基因分型。根據(jù)瓊脂糖凝膠電泳結(jié)果確定個(gè)體基因型，計(jì)算各位點(diǎn)

6、在病例組與對(duì)照組中的基因型頻率及等位基因頻率。
　　 3.Hardy-Weinberg平衡吻合度檢驗(yàn)：根據(jù)Hardy-Weinberg平衡定律計(jì)算各多態(tài)位點(diǎn)在病例組和對(duì)照組中的預(yù)期基因型頻率，利用卡方檢驗(yàn)比較觀察到的基因型頻率與預(yù)期基因型頻率間的差異，以PO.05則說明選取的病例組與對(duì)照組處于遺傳平衡狀態(tài)，具有群體代表性。
　　 4.基因型與等位基因分布差異檢測(cè)：利用卡方檢驗(yàn)比較各

7、多態(tài)位點(diǎn)在病例組與對(duì)照組間的基因型頻率及等位基因頻率差異，以P　　 5

8、.病例組中冠脈受累分支分析：按照冠狀動(dòng)脈受累支數(shù)對(duì)病例組進(jìn)行分層，以Judkins方法行選擇性冠狀動(dòng)脈造影，根據(jù)造影結(jié)果統(tǒng)計(jì)病變支數(shù)（左主干、前降支、回旋支、右冠狀動(dòng)脈或其主要分支狹窄≥50％），分為1、2、3支病變；觀察不同受累支數(shù)之間基因型和等位基因頻率分布是否具有差異性。
　　 6.現(xiàn)有樣本的統(tǒng)計(jì)學(xué)效力檢驗(yàn)：利用PGA軟件(Power for Genetic AssociationAnalysis，PGA)計(jì)算現(xiàn)有樣本能夠

9、提供的統(tǒng)計(jì)學(xué)效力，以避免由于II類錯(cuò)誤引起的假陰性結(jié)果。
　　 [研究結(jié)果]
　　 1.TNFSF4基因rs1234314,rs45454293,rs3850641,rs1234313,rs3861950位點(diǎn)在山東漢族人群中具有多態(tài)性；五位點(diǎn)在病例組與對(duì)照組中均處于遺傳平衡狀態(tài)；基因型和等位基因頻率分布在病例組及對(duì)照組間的差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。比較不同受累支數(shù)之間基因型與等位基因頻率分布發(fā)現(xiàn)，在冠脈受累各支

10、之間各位點(diǎn)基因型和等位基因頻率分布差異也無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　 2.TNFRSF4基因rs2298212多態(tài)位點(diǎn)在山東漢族人群中具有多態(tài)性；在病例組與對(duì)照組中均處于遺傳平衡狀態(tài)；基因型和等位基因頻率分布在病例組與對(duì)照組間無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P>0.05)。比較不同受累支數(shù)之間基因型與等位基因頻率分布發(fā)現(xiàn)，在冠脈受累1支與3支之間，基因型及等位基因頻率分布方面均具顯著性差異（P<0.05）。
　　 3.應(yīng)用PGA軟件，在檢驗(yàn)水準(zhǔn)a

11、=0.05，罕見等位基因頻率假定為0.17，OR假定為1.4，連鎖不平衡系數(shù)為1的假定條件下，現(xiàn)有樣本的統(tǒng)計(jì)效力超過了80％。
　　 [研究結(jié)論]
　　 1.TNFSF4基因rs1234314，rs45454293，rs3850641，rs1234313，rs3861950位點(diǎn)與山東漢族人群冠狀動(dòng)脈粥樣硬化心臟病之間無相關(guān)性。該結(jié)果有待于利用更大的樣本和不同人群的病例對(duì)照研究來進(jìn)行驗(yàn)證。
　　 2.OX40基因r