乙型肝炎病毒與DNAJB4轉(zhuǎn)錄調(diào)節(jié)作用機(jī)制的體外研究.pdf

1、目的：
　　 探討體外培養(yǎng)條件下HBV與DNAJB4基因轉(zhuǎn)錄水平表達(dá)的關(guān)系，揭示HBV誘發(fā)肝癌發(fā)生的新機(jī)制，為HBV感染的治療提供新的思路，為深入理解DNAJB4的轉(zhuǎn)錄調(diào)節(jié)機(jī)制提供新的知識(shí)。
　　 方法：
　　 1.用RT-PCR和Real-time PCR檢測(cè)DNAJB4在HepG2細(xì)胞和HepG2.2.15細(xì)胞中轉(zhuǎn)錄水平的表達(dá)。
　　 2.構(gòu)建DNAJB4啟動(dòng)子蟲(chóng)熒光素酶報(bào)告質(zhì)粒，分別與HBV表達(dá)質(zhì)粒

2、、對(duì)照質(zhì)粒共轉(zhuǎn)染HepG2細(xì)胞，利用雙熒光素酶報(bào)告基因檢測(cè)系統(tǒng)，檢測(cè)熒光素酶活性。
　　 3.構(gòu)建HBs、HBp、HBc及HBx表達(dá)質(zhì)粒，分別與DNAJB4啟動(dòng)子蟲(chóng)熒光素酶報(bào)告質(zhì)粒共轉(zhuǎn)染HepG2細(xì)胞，利用雙熒光素酶報(bào)告基因檢測(cè)系統(tǒng)，檢測(cè)熒光素酶活性。
　　 結(jié)果：
　　 1.RT-PCR結(jié)果顯示DNAJB4在HepG2.2.15細(xì)胞中的表達(dá)量是其在HepG2細(xì)胞中表達(dá)量的3倍，Real-time PCR結(jié)果顯示

3、DNAJB4在HepG2.2.15細(xì)胞中的表達(dá)量是其在HepG2細(xì)胞中表達(dá)量的2.59倍。
　　 2.成功構(gòu)建了DNAJB4啟動(dòng)子蟲(chóng)熒光素酶報(bào)告質(zhì)粒，且DNAJB4啟動(dòng)子蟲(chóng)熒光素酶報(bào)告質(zhì)粒與HBV表達(dá)質(zhì)粒共轉(zhuǎn)染組的相對(duì)熒光素酶活性是其對(duì)照組的2.28倍。
　　 3.轉(zhuǎn)染HBs和HBc表達(dá)質(zhì)粒組的相對(duì)熒光素酶活性分別是其對(duì)照組的2.11倍和1.77倍，而HBx、HBp表達(dá)質(zhì)粒對(duì)熒光素酶活性沒(méi)有影響。
　　 結(jié)論：<