乙型肝炎致病機(jī)制及其核酸疫苗作用機(jī)制研究.pdf

1、乙型肝炎病毒在世界范圍內(nèi)廣泛流行,中國(guó)是慢性乙型肝炎高發(fā)地區(qū),每年約有35萬(wàn)人死于與乙肝相關(guān)的疾病(如：肝硬化、肝癌等)。在眾多的乙肝病毒攜帶者中,血清學(xué)檢查并沒(méi)有轉(zhuǎn)氨酶的升高,肝臟的病理切片檢查亦無(wú)明顯的病理?yè)p害,此時(shí)機(jī)體免疫系統(tǒng)對(duì)乙肝病毒在肝細(xì)胞內(nèi)的存在與復(fù)制處于一種“容忍”狀態(tài)。因此現(xiàn)在認(rèn)為乙肝病毒是一種無(wú)細(xì)胞毒性病毒,只要機(jī)體免疫系統(tǒng)不對(duì)感染的肝細(xì)胞進(jìn)行攻擊就不會(huì)有肝細(xì)胞的損害。但在一些對(duì)乙肝病毒抗原耐受的轉(zhuǎn)基因鼠中卻不同比例地

2、發(fā)生了癌變,這說(shuō)明在免疫系統(tǒng)不參與的情況下,乙肝病毒抗原在宿主細(xì)胞內(nèi)表達(dá)與積累也會(huì)造成宿主細(xì)胞的損害。因此弄清楚在沒(méi)有免疫系統(tǒng)參與的情況下乙肝病毒是否對(duì)宿主細(xì)胞有損害及怎樣的損害,對(duì)乙型肝炎預(yù)防策略、治療靶點(diǎn)的選擇有重要意義。在我們的研究中對(duì)6-8周齡的乙肝轉(zhuǎn)基因鼠肝臟的蛋白、小分子代謝物利用蛋白質(zhì)組學(xué)、代謝組學(xué)技術(shù)進(jìn)行比較。發(fā)現(xiàn)在轉(zhuǎn)基因鼠中谷胱甘肽過(guò)氧化物酶-1(Gpx1)表達(dá)下調(diào),而脂肪酸結(jié)合蛋白-5(fabp-5),?；鵆oA結(jié)合

3、蛋白的表達(dá)上調(diào)。代謝組學(xué)研究結(jié)果顯示在轉(zhuǎn)基因鼠肝臟中包括11-脫氫血栓素B2在內(nèi)盟脂類代謝的中間或最終代謝產(chǎn)物發(fā)生了紊亂。這種整合的“組學(xué)”結(jié)果表明乙肝抗原的表達(dá)與積累能擾亂宿主細(xì)胞的脂類代謝并介導(dǎo)了一定程度的氧化應(yīng)激損傷。 正因?yàn)槟壳叭狈τ行У目共《局委熕幬锸沟靡倚透窝最A(yù)防性疫苗顯得格外重要。目前使用的重組蛋白只能夠激起機(jī)體有效的體液免疫,而細(xì)胞免疫在該疾病的預(yù)防與治療過(guò)程中又起著非常重要的作用。核酸疫苗是疫苗研制的一種重要形

4、式,具有研發(fā)周期相對(duì)短、純化技術(shù)相對(duì)成熟、可同時(shí)誘導(dǎo)體液和細(xì)胞免疫的優(yōu)點(diǎn),被較多地應(yīng)用當(dāng)前的傳染病疫苗的研制中。前期的研究表明單次肌肉注射表達(dá)表面抗原的質(zhì)粒能在小鼠體內(nèi)表達(dá)表面抗原,并激起機(jī)體較強(qiáng)的免疫保護(hù)反應(yīng)。許多臨床試驗(yàn)表明核酸疫苗安全性好,不引起系統(tǒng)的毒性反應(yīng)。但最近也有文獻(xiàn)報(bào)道核酸疫苗導(dǎo)致的表面抗原及抗表面抗原抗體在小鼠血清中持續(xù)存在,免疫復(fù)合物的形成和沉積,能引起小鼠肝腎功能的損害。另外,一些研究表明核酸疫苗引起的免疫反應(yīng)很難

5、在大動(dòng)物或人體內(nèi)得到重現(xiàn)。因此我們認(rèn)為對(duì)核酸疫苗的免疫保護(hù)機(jī)制及安全性的了解還很欠缺,很有必要對(duì)核酸疫苗進(jìn)行全面的評(píng)估。在我們的研究中利用蛋白質(zhì)學(xué)與代謝組學(xué)技術(shù)對(duì)核酸疫苗、重組蛋白、質(zhì)粒空載體及PBS免疫小鼠血清中蛋白、小分子代謝物進(jìn)行比較研究。我們發(fā)現(xiàn)植物鞘氨醇、二氫鞘氨醇、神經(jīng)酰胺在核酸疫苗免疫小鼠血清中明顯升高。另外,血清中包括載脂蛋白A-I前體在內(nèi)的眾多蛋白也發(fā)生了變化。這些結(jié)果表明核酸疫苗免疫能刺激肝臟的鞘脂合成與代謝,可能會(huì)