何首烏中蒽醌類(lèi)化合物GXHSWAQ-1對(duì)卵巢癌耐藥細(xì)胞逆轉(zhuǎn)作用及機(jī)制的研究.pdf

1、[目的] 擬探討廣西產(chǎn)何首烏蒽醌類(lèi)化合物GXHSWAQ-1對(duì)人卵巢癌耐藥細(xì)胞株SKOV3/DDP細(xì)胞耐藥性的影響及其可能的作用機(jī)制，為開(kāi)發(fā)傳統(tǒng)中藥何首烏臨床應(yīng)用提供理論基礎(chǔ)。 [方法] 體外應(yīng)用濃度梯度遞增結(jié)合低劑量持續(xù)誘導(dǎo)法，誘導(dǎo)出卵巢癌多藥耐藥細(xì)胞株SKOV3/DDP，計(jì)算細(xì)胞的耐藥倍數(shù)，探討其多藥耐藥性；以卵巢癌親本細(xì)胞SKOV3和多藥耐藥細(xì)胞株SKOV3/DDP為研究對(duì)象，通過(guò)噻唑藍(lán)(MTT)法觀察GXH

2、SWAQ-1在無(wú)細(xì)胞毒濃度下對(duì)卵巢癌細(xì)胞耐受順鉑(DDP)和卡鉑(CBP)的逆轉(zhuǎn)作用；采用流式細(xì)胞儀分析GXHSWAQ-1對(duì)細(xì)胞周期調(diào)控、細(xì)胞凋亡以及活性氧(ROS)的影響；用Real-time PCR技術(shù)檢測(cè)耐藥相關(guān)基因HIF-1α、STAT1、GSTP1 mRNA表達(dá)情況；用Western blotting法檢測(cè)HIF-1α蛋白表達(dá)情況。 [結(jié)果] 1.耐藥倍數(shù)測(cè)定：MTT法檢測(cè)到DDP作用48h的SKOV3和SKO

3、V3/DDP細(xì)胞IC50分別為8.6 mg/L和24.2mg/L，其耐藥倍數(shù)為2.8；CBP作用48h的SKOV3和SKOV3/DDP細(xì)胞IC50分別為63.3 mg/L和266.7mg/L，其耐藥倍數(shù)為4.2，表現(xiàn)出多藥耐藥性。 2.GXHSWAQ-1對(duì)SKOV3和SKOV3/DDP細(xì)胞存活率的影響：GXHSWAQ-1對(duì)SKOV3和SKOV3/DDP細(xì)胞的抑制作用隨濃度增高而增強(qiáng)。7.8mg/L以下濃度(含7.8mg/L)的G

4、XHSWAQ-1作用時(shí)，SKOV3和SKOV3/DDP細(xì)胞的抑制率均小于10％，可視為無(wú)細(xì)胞毒性濃度。 3.GXHSWAQ-1對(duì)SKOV3/DDP細(xì)胞的耐藥性逆轉(zhuǎn)作用：無(wú)細(xì)胞毒作用的7.8 mg/L和3.9 mg/L GXHSWAQ-1能逆轉(zhuǎn)SKOV3/DDP細(xì)胞對(duì)DDP或CBP的耐藥性，對(duì)DDP的逆轉(zhuǎn)倍數(shù)分別為1.91倍和1.30倍，對(duì)CBP的逆轉(zhuǎn)倍數(shù)分別為2.59倍和1.84倍。 4.GXHSWAQ-1對(duì)SKOV3/

5、DDP細(xì)胞凋亡、細(xì)胞周期調(diào)控以及活性氧(ROS)的影響：7.8 mg/L GXHSWAQ-1聯(lián)合IC50濃度的DDP或CBP時(shí)，SKOV3/DDP細(xì)胞的凋亡率高于單獨(dú)DDP或CBP作用組(P<0.01)，G0-G1期細(xì)胞數(shù)減少(P<0.01)，S期和G2-M期細(xì)胞增多(P<0.01)。GXHSWAQ-1可誘導(dǎo)SKOV3/DDP細(xì)胞ROS含量升高，具有劑量依賴(lài)性；7.8 mg/L GXHSWAQ-1聯(lián)合IC50濃度的DDP或CBP時(shí)，RO

6、S的含量均明顯高于單獨(dú)DDP或CBP作用組(P<0.01)。 5.GXHSWAQ-1對(duì)SKOV3/DDP細(xì)胞HIF-1α、STAT1、GSTP1 mRNA表達(dá)的影響：與SKOV3比較，SKOV3/DDP細(xì)胞的HIF-1α、STAT1、GSTP1 mRNA表達(dá)明顯升高(P<0.01)。3.9mg/L和7.8mg/L GXHSWAQ-1作用均可下調(diào)HIF-1α、STAT1 mRNA表達(dá)，存在劑量一效應(yīng)依賴(lài)關(guān)系。7.8mg/L GXH

7、SWAQ-1作用可下調(diào)GSTP1 mRNA表達(dá)，但3.9mg/L GXHSWAQ-1作用不明顯。7.8mg/LGXHSWAQ-1聯(lián)合IC50濃度的DDP或CBP時(shí)，三個(gè)耐藥相關(guān)基因的表達(dá)與單獨(dú)化療藥組作用相比明顯下調(diào)(P<0.01)。 6.GXHSWAQ-1對(duì)SKOV3/DDP細(xì)胞HIF-1α蛋白表達(dá)的影響：與SKOV3細(xì)胞相比，SKOV3/DDP的HIF-1α蛋白表達(dá)明顯升高(P<0.01)；單純DDP或CBP對(duì)SKOV3/D

8、DP細(xì)胞的HIF-1α改變不明顯；3.9 mg/L～15.6 mg/LGXHSWAQ-1可使SKOV3/DDP細(xì)胞HIF-1α蛋白表達(dá)下降，存在劑量-效應(yīng)依賴(lài)關(guān)系。7.8 mg/L GXHSWAQ-1聯(lián)合IC50濃度的DDP或CBP時(shí)，HIF-1α蛋白表達(dá)與單獨(dú)DDP或CBP組比較明顯下降(P<0.01)。 [結(jié)論] 1.成功的誘導(dǎo)篩選了順鉑耐藥卵巢癌細(xì)胞株SKOV3/DDP，為研究逆轉(zhuǎn)卵巢鉑類(lèi)耐藥提供了體外試驗(yàn)?zāi)Ｐ汀?/p>