天然紫草萘醌類化合物抗腫瘤耐藥及轉移的體內外研究.pdf

1、腫瘤耐藥性是臨床化療的主要障礙。從細胞學層面看，其機理主要包括細胞表面耐藥蛋白高表達介導的多藥耐藥及抗凋亡因子過表達導致的凋亡耐受。目前臨床上還沒有針對耐藥腫瘤的有效藥物。2007年，本研究小組首次報道紫草素能誘導腫瘤細胞發(fā)生一種非凋亡的程序性死亡，即Necroptosis，并以此繞開了腫瘤細胞的耐藥機制，對藥敏和耐藥腫瘤細胞都有同等程度的殺傷作用。但是，僅有一個紫草素的發(fā)現不僅沒有普遍性意義，更不足以為開發(fā)這一類新藥提供理論基礎：如果

2、紫草素結構的微小變化就會使其喪失這種特性，那將無望開發(fā)出一類基于誘導necroptosis的新型小分子藥物。因此，本論文以紫草素為切入點，對六種新的天然紫草萘醌類化合物，即去氧紫草素、乙酰紫草素、異丁酰紫草素、β，β-二甲基丙烯酰紫草素、異戊酰紫草素及2-甲基-正丁酰紫草素是否也具有誘導腫瘤細胞發(fā)生necroptosis從而克服腫瘤耐藥性的特點進行探討。MTT實驗結果表明，該類化合物對八對藥敏和耐藥腫瘤細胞具有相似的IC50值，證明其在

3、藥敏和耐藥細胞中有相似的殺傷作用，并發(fā)現2-甲基-正丁酰紫草素具有比紫草素更強的細胞毒作用。其次，Necrostatin-1能有效抑制這六種化合物引起的細胞死亡，初步證明該死亡模式為necroptosis。以2-甲基-正丁酰紫草素為代表的進一步死亡模式鑒定實驗顯示，死亡細胞出現典型的壞死樣形態(tài)特征，如細胞膜破裂、胞漿空泡化、線粒體極度腫脹等，并發(fā)現有雙層膜包裹的自噬小體，提示自噬參與該細胞死亡。同時，Nec-1能部分抑制2-甲基—正丁酰

4、紫草素引起的線粒體膜電位下降，死亡細胞沒有caspase-3，8，9的激活，不出現凋亡亞二倍體峰，也沒有檢測到DNA梯帶，提示2-甲基—正丁酰紫草素誘導腫瘤細胞發(fā)生necroptosis。體內毒性試驗顯示，一周內灌胃給予三次100mg/kg的2-甲基—正丁酰紫草素引起小鼠體重的適度減輕，但無其他明顯毒性表現，不引起小鼠死亡。同樣劑量的紫草素對小鼠沒有明顯毒性。體內抑瘤實驗表明，2-甲基—正丁酰紫草素、紫草素及阿霉素對K562腫瘤均無明顯

5、抑制效果；2-甲基—正丁酰紫草素對K562/ADR耐藥腫瘤有很好的抑制效果，腫瘤大小與對照組相比有顯著性差異，而紫草素和阿霉素無明顯抑瘤效果。小鼠乳腺癌細胞4T1在BALB/c小鼠中自發(fā)肺轉移的動物模型表明，紫草素對原位4T1腫瘤的抑制效果與對照組相比有極顯著性差異；對4T1肺轉移無明顯抑制作用。本研究表明天然紫草萘醌類化合物是一類能誘導腫瘤細胞發(fā)生necroptosis從而克服腫瘤耐藥性的小分子化合物，提示其具有一定的臨床應用價值和開