產(chǎn)AmpC酶的大腸埃希菌分子流行特征及PBP4在其耐藥機制中作用的探討.pdf

1、目的：
　　 研究上海市第六人民醫(yī)院產(chǎn)AmpCβ-內(nèi)酰胺酶(AmpC酶)大腸埃希菌（Escherichia coli，E.coli）的分子流行特征；探討青霉素結合蛋白4(penicillin-binding protein 4，PBP4)在產(chǎn)AmpC酶的E.coli耐藥機制中的作用。
　　 方法：
　　 1．使用頭孢西丁篩選法初步篩選產(chǎn)AmpC酶的E.coli，對初篩陽性的E.coli進行頭孢西丁三維試驗及多重P

2、CR方法進一步篩選產(chǎn)AmpC酶的E.coli;
　　 2．通過多重PCR方法對34株產(chǎn)AmpC酶的E.coli進行系統(tǒng)分型；
　　 3．采用多位點序列分型(Multilocus sequence typing，MLST)技術對E.coli進行分子分型；
　　 4.PCR法擴增編碼非必需PBPs基因；
　　 5．實時熒光定量PCR方法檢測E.coli中編碼PBP4基因dacB和編碼AmpC基因ampC的轉錄

3、情況；
　　 6.MIC法檢測細菌對藥物的敏感性；
　　 7．克隆dacB基因并轉化入E.coli ATCC25922中，實時熒光定量PCR方法檢測重組子的dacB mRNA和ampC mRNA表達水平并比較轉化前后MIC值。
　　 結果：
　　 1.1783株E．coli中頭孢西丁初篩陽性菌株共299株，其中頭孢西丁三維試驗陽性共56株，再經(jīng)多重PCR篩選后共收集到產(chǎn)AmpC酶的E.coli34株；

4、r>　　 2.34株E.coli系統(tǒng)分型共分為四個群，其中A群6株占17.64％，B1群5株占14.71%，B2群5株占14.71%，D群18株占52.94%;
　　 3.MLST得到了14個序列型(Sequence type，ST)，其中包含1個未知的ST；共得到6個己知序列型克隆系（ST clonal complexes，ST Cplx），其中ST38克隆系最多，占總數(shù)的17.65%;
　　 4．基因dacB、da

5、cA、dacC、ampH、ampC和pbpG經(jīng)PCR擴增后均為陽性；
　　 5．實時熒光定量PCR檢測得26株E.coli dacB mRNA高表達，占76.47%，8株E.coli中dacB mRNA低表達，占23.53%，對高表達組和低表達組中ampC基因實時熒光定量PCR檢測的結果進行t檢驗，得P=0.011差異有統(tǒng)計學意義，即在dacB mRNA高表達組中ampC的轉錄水平高于dacB mRNA低表達組；
　　

6、6.dacB mRNA高表達組中菌株的藥物敏感率相對較低；
　　 7．重組子中ampC轉錄水平有所提高，對藥物的耐藥性也有所增加且主要表現(xiàn)在第一代頭孢菌素和第二代頭孢菌素。
　　 結論：本研究中產(chǎn)AmpC酶的E．coli系統(tǒng)發(fā)育群主要集中于D群；屬于14個不同的序列型，ST38占總數(shù)最多，其中5個攜帶DHA菌株屬于ST131/B2克隆株；本研究中dacB mRNA高表達組中ampC轉錄水平高于低表達組，推測E.coli臨