B淋巴細(xì)胞刺激因子及增殖誘導(dǎo)配體在多發(fā)性骨髓瘤中表達(dá)及臨床意義的研究.pdf

1、目的：B淋巴細(xì)胞刺激因子（B lymphocytestimulator，BLyS）和增殖誘導(dǎo)配體（a proliferation-inducling ligand，APRIL）是近年來發(fā)現(xiàn)的腫瘤壞死因子（TNF）家族的新成員。二者因具有高度同源性（48％基因序列相同，33％氨基酸相同）和共同的受體（BCMA和TACI）而關(guān)系密切。BLyS和APRIL通過與受體的結(jié)合影響B(tài)、T淋巴細(xì)胞的激活、增殖和存活而廣泛參與免疫調(diào)節(jié)，尤其與免疫球蛋白

2、分泌、自身抗體生成等體液免疫功能紊亂關(guān)系密切。已有研究發(fā)現(xiàn)BLyS/APRIL系統(tǒng)的異常與腫瘤和多種自身免疫性疾病的發(fā)生、發(fā)展有關(guān)。目前關(guān)于BLyS/APRIL系統(tǒng)與自身免疫性疾?。ㄈ缦到y(tǒng)性紅斑狼瘡、干燥綜合征等）關(guān)系的研究較多，而與多發(fā)性骨髓瘤（Multiple myeloma，MM）關(guān)系的研究尚少。本文以酶聯(lián)免疫吸附實驗（ELISA）檢測并分析MM患者血清中BLyS和.APRIL水平，探討B(tài)LyS/APRIL系統(tǒng)在MM發(fā)病中的作用及

3、其與臨床腫瘤負(fù)荷及預(yù)后指標(biāo)的相關(guān)性。
　　 方法：
　　 1.標(biāo)本的采集
　　 用真空采血管分別抽取健康成年人（即對照組，14例）和多發(fā)性骨髓瘤患者（實驗組，14例）靜脈血4ml，14例患者分別抽取其治療前（即初治組），治療3個療程后（即治療中期組）和治療6個療程后（即治療后期組）的血液標(biāo)本。血液離體后室溫放置30分鐘，2000r/min離心15分鐘，取上層血清分裝于1.5ml的離心管中。標(biāo)本放入-80℃的低溫冰

4、箱中保存?zhèn)溆谩?br>　　 2.酶聯(lián)免疫吸附法檢測血清BLyS、APRIL水平，同時檢測血清IL-6水平。
　　 樣本孔內(nèi)加入100ul的蒸餾水后加入50ul的血清樣本，室溫孵育三小時，倒掉孔內(nèi)液體并用洗液緩沖液清洗6次，每個孔內(nèi)加入100ul的TMB，室溫孵育10分鐘后加入100ul的反應(yīng)終止液，于450nm的地方讀取吸光值，測定健康對照者和多發(fā)性骨髓瘤患者初治組、治療中期組及治療后期組血清中BLyS、 APRIL及IL-6

5、的濃度變化。
　　 3.放射免疫分析方法測量血清β2-微球蛋白含量
　　 取樣本50μl加入聚苯乙烯試管中，同時加入抗血清100μl及123I-β-2-微球蛋白100μl，混勻后室溫靜止30至60分鐘，再加入PR分離液500μl混勻后室溫靜止15分鐘，離心3500rpm/min15分鐘，吸棄上清，放入放免儀讀數(shù)，計算健康對照者及多發(fā)性骨髓瘤患者初治組、治療中期組及治療后期組的外周血β2-微球蛋白含量。
　　 4.

6、統(tǒng)計臨床資料
　　 LDH、肌酐、白蛋白、免疫球蛋白、鈣離子濃度、血紅蛋白、骨髓中漿細(xì)胞百分比等數(shù)據(jù)均采用患者及健康對照者入院檢查的相關(guān)化驗結(jié)果。
　　 5.測量所有數(shù)據(jù)均采用SPSS13.0統(tǒng)計軟件處理，計量資料以均數(shù)士標(biāo)準(zhǔn)差（x±s）來表示；組間樣本比較采用兩個獨立樣本的t檢驗及重復(fù)測量的方差分析；組內(nèi)樣本各個指標(biāo)之間采用pearson相關(guān)性分析。檢驗差異的顯著性用P值表示，P<0.05表示差異顯著，有統(tǒng)計學(xué)意義。<

7、br>　　 結(jié)果：
　　 1.多發(fā)性骨髓瘤患者初治組血清BLvS濃度（1.102±0.446 ng/ml）顯著高于治療中期組（0.595±0.184 ng/ml）、治療后期組（0.355±0.083 ng/ml）和對照組（0.641±0.401ng/ml），差異有顯著性（p<0.05）；治療中期組的BLyS濃度顯著高于治療后期組，兩者之間差異有顯著性（p<0.05）；治療中期組及治療后期組的BlyS水平與對照組之間沒有差異（p

8、>0.05）；初治組血清APRIL濃度（1.417±0.391 ng/ml）顯著高于治療后期組（1.061±0.117 ng/ml）和對照組（1.222±0.317 ng/ml），差異有顯著性（p<0.05）；初治組血清APRIL濃度與治療中期組（1.401±0.191 ng/ml）之間沒有差異（p>0.05）；治療中期組的APRIL濃度顯著高于治療后期組及對照組，差異有顯著性（p<0.05）；治療后期組與對照組之間的APRIL濃度沒有

9、差異性（p>0.05）。
　　 2.多發(fā)性骨髓瘤患者初治組血清β2-MG濃度（5.114±0.804μg/ml）顯著高于治療中期組（1.984±0.409μg/ml）、治療后期組（2.011±0.518μg/ml）和對照組（2.755±1.469μg/ml），差異有顯著性（p<0.05）；治療中期組血清β2-MG水平與治療后期組及對照組之間沒有差異（p>0.05）；治療后期組與對照組之間的β2-MG濃度沒有差異（p>0.05）。

10、
　　 3我們通過總結(jié)臨床病例得到LDH的數(shù)據(jù)經(jīng)分析后得出以下結(jié)果：多發(fā)性骨髓瘤患者初治組血清LDH濃度（360.071±90.620 U/L）顯著高于治療中期組（189.507±34.893 U/L）、治療后期組（150.064±15.385U/L）和對照組（150.071±33.253 U/L），差異有顯著性（p<0.05）；治療中期組血清LDH水平顯著高于治療后期組及對照組，差異有顯著性（p<0.05）；治療后期組的LDH

11、水平與對照組之間沒有差異（P>0.05）。
　　 4.患者組外周血IL-6的濃度是16.902±6.025 pg/ml。
　　 5.患者組外周血BLyS濃度和APRIL濃度之間呈正相關(guān)（p<0.05）；
　　 6.BLyS的濃度與外周血中ALB呈負(fù)相關(guān)（p<0.05）；與外周血中IL-6、β2-微球蛋、LDH、免疫球蛋白、骨髓中漿細(xì)胞百分比、肌酐均呈正相關(guān)（p<0.05）；與外周血血清中鈣離子及血紅蛋白含量之間無

12、相關(guān)性（p>0.05）。
　　 7.APRIL的濃度與外周血中ALB呈負(fù)相關(guān)（p<0.05）；與外周血中IL-6、β2-微球蛋白、LDH、免疫球蛋白、骨髓中漿細(xì)胞百分比、肌酐均呈正相關(guān)（p<0.05）；與外周血血清中鈣離子及血紅蛋白含量之間無相關(guān)性（p>0.05）。
　　 結(jié)論：
　　 1、BLyS和APRIL在多發(fā)性骨髓瘤患者的外周血中高表達(dá)，并隨著其病情的好轉(zhuǎn)而逐漸下降，提示BLyS和APRIL與多發(fā)性骨髓瘤