腎臟近曲小管多巴胺D4受體對(duì)血管緊張素Ⅱ1型受體的異常調(diào)節(jié)在原發(fā)性高血壓發(fā)生中的作用.pdf

1、原發(fā)性高血壓(Essentialhypertension)和高血壓所致的心、腦、血管、腎并發(fā)癥是危害人類(lèi)健康的主要因素，明確其發(fā)病機(jī)理和病理生理機(jī)制是尋找有效防治措施的重要基礎(chǔ)。高血壓的發(fā)生和發(fā)展是由于兩種機(jī)制，分別為機(jī)體升壓系統(tǒng)的過(guò)度激活和抗高血壓系統(tǒng)的活性降低，其中，多巴胺能系統(tǒng)作為抗高血壓系統(tǒng)的一種，其功能的異常在高血壓發(fā)生的作用研究領(lǐng)域已經(jīng)得到廣泛一致的認(rèn)同。
　　腎臟是人體主要的尿鈉排泄器官，它通過(guò)對(duì)尿鈉重吸收的有序調(diào)控

2、作用，從而達(dá)到調(diào)節(jié)血壓的目的。大量的研究表明，在腎臟各部分中，腎近曲小管(Renalproximaltubule，RPT)的作用更為重要，它負(fù)責(zé)腎臟全部尿鈉排泄的65-70％的工作，同時(shí)該段也是合成多巴胺的重要部位之一，多巴胺通過(guò)其相應(yīng)的多巴胺受體直接或間接參與腎臟利鈉排尿的工作，尤其是當(dāng)體內(nèi)鈉負(fù)荷過(guò)多時(shí)，多巴胺負(fù)責(zé)50％左右的尿鈉排泄。多巴胺受體分為D1類(lèi)受體(包括D1和D5)和D2類(lèi)(包括D2、D3、D4)受體。有報(bào)道指出，敲除小鼠

3、的多巴胺D4受體可顯著升高實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的收縮壓和舒張壓;在基礎(chǔ)血漿和腎臟腎素濃度相同的基礎(chǔ)上，相對(duì)于正常野生小鼠，D4受體敲除小鼠的腎臟AT1受體蛋白表達(dá)在顯著增加。我們?cè)O(shè)想多巴胺D4受體對(duì)AT1受體可能存在調(diào)節(jié)作用，并且，這種調(diào)節(jié)作用的失衡可能參與了高血壓的發(fā)生。
　　為驗(yàn)證上述設(shè)想，本課題擬采用大鼠(Wistar-Kyoto，正常血壓)和自發(fā)性高血壓大鼠(Spontaneouslyhypertensiverat，SHR)腎臟RPT

4、細(xì)胞為研究對(duì)象，分析D4受體對(duì)AT1受體表達(dá)及功能的影響，區(qū)分在正常和高血壓狀態(tài)下的改變，初步探討多巴胺D4受體和AT1受體在高血壓發(fā)病中的作用。
　　主要研究?jī)?nèi)容:
　　第一部分腎臟近曲小管多巴胺D4受體對(duì)AT1受體的作用:
　　1.確定多巴胺D4受體和AT1在RPT的共存情況。
　　2.以WKY大鼠RPT細(xì)胞為研究對(duì)象，分析不同濃度及處理時(shí)間的D4受體激動(dòng)劑PD168077對(duì)細(xì)胞AT1受體蛋白表達(dá)的作用。

5、r>　　3.D4受體拮抗劑L745870檢測(cè)分析D4受體對(duì)RPT細(xì)胞AT1受體蛋白作用的特異性。
　　第二部分腎臟近曲小管多巴胺D4受體調(diào)節(jié)AT1受體的機(jī)制
　　1.初步討論多巴胺D4受體對(duì)AT1作用的分子機(jī)制和信號(hào)途徑，我們分別用PKC抑制劑19-31，Ca2+拮抗劑尼卡地平等驗(yàn)證信號(hào)途徑。
　　第三部分高血壓狀態(tài)下多巴胺D4受體對(duì)AT1受體的蛋白表達(dá)和功能變化
　　1.利用D4受體激動(dòng)劑PD168077分別作

6、用于WKY和SHR的RPT細(xì)胞，區(qū)別在正常狀態(tài)下和高血壓狀態(tài)下D4受體調(diào)節(jié)AT1受體作用差異。
　　2.研究PD168077及Ang-Ⅱ?qū)a+-K+-ATP酶活性作用在WKY和SHR大鼠RPT細(xì)胞的區(qū)別。
　　主要研究方法:
　　1.WKY大鼠和SHR大鼠的RPT細(xì)胞培養(yǎng)。
　　2.分別用免疫印跡法測(cè)定多巴胺D4受體調(diào)節(jié)AT1受體作用和機(jī)制
　　3.激光共聚焦顯微鏡測(cè)定確定多巴胺D4受體和AT1在RPT的

7、共存情況
　　4.用酶活性方法測(cè)定多巴胺D4受體調(diào)節(jié)AT1受體作用的功能。
　　主要研究結(jié)果:
　　1.D4受體和AT1受體在WKYRPT細(xì)胞共存。D4受體可抑制WKY大鼠RPT細(xì)胞AT1受體蛋白表達(dá)，該作用呈濃度依賴(lài)性;并同時(shí)呈時(shí)間依耐性，D4對(duì)AT1受體抑制作用可被D4阻斷劑L745870所阻斷，提示該抑制作用是通過(guò)D4受體完成。
　　2.結(jié)果提示尼卡地平(10-8mol/L)和PKC阻斷劑存在的情況下，D4

8、受體對(duì)AT1受體蛋白抑制作用被阻斷提示該抑制作用可能是通過(guò)鈣通道-PKC途徑。
　　3.D4受體可抑制WKY大鼠RPT細(xì)胞AT1受體蛋白表達(dá)，但在SHR的RPT細(xì)胞中此作用受損，表現(xiàn)為AT1受體蛋白表達(dá)上調(diào);D4受體對(duì)Ang-Ⅱ誘導(dǎo)的Na+-K+-ATP酶活性升高具有抑制作用，這種作用卻在SHRRPT細(xì)胞中受損。
　　結(jié)論
　　腎臟多巴胺D4受體對(duì)RPT細(xì)胞AT1受體表達(dá)及功能有抑制作用，該作用可能經(jīng)由鈣離子-PKC通