腎臟近曲小管多巴胺D4受體對血管緊張素Ⅱ1型受體的異常調(diào)節(jié)在原發(fā)性高血壓發(fā)生中的作用.pdf

1、原發(fā)性高血壓(Essentialhypertension)和高血壓所致的心、腦、血管、腎并發(fā)癥是危害人類健康的主要因素，明確其發(fā)病機理和病理生理機制是尋找有效防治措施的重要基礎(chǔ)。高血壓的發(fā)生和發(fā)展是由于兩種機制，分別為機體升壓系統(tǒng)的過度激活和抗高血壓系統(tǒng)的活性降低，其中，多巴胺能系統(tǒng)作為抗高血壓系統(tǒng)的一種，其功能的異常在高血壓發(fā)生的作用研究領(lǐng)域已經(jīng)得到廣泛一致的認同。
　　腎臟是人體主要的尿鈉排泄器官，它通過對尿鈉重吸收的有序調(diào)控

2、作用，從而達到調(diào)節(jié)血壓的目的。大量的研究表明，在腎臟各部分中，腎近曲小管(Renalproximaltubule，RPT)的作用更為重要，它負責腎臟全部尿鈉排泄的65-70％的工作，同時該段也是合成多巴胺的重要部位之一，多巴胺通過其相應的多巴胺受體直接或間接參與腎臟利鈉排尿的工作，尤其是當體內(nèi)鈉負荷過多時，多巴胺負責50％左右的尿鈉排泄。多巴胺受體分為D1類受體(包括D1和D5)和D2類(包括D2、D3、D4)受體。有報道指出，敲除小鼠

3、的多巴胺D4受體可顯著升高實驗動物的收縮壓和舒張壓;在基礎(chǔ)血漿和腎臟腎素濃度相同的基礎(chǔ)上，相對于正常野生小鼠，D4受體敲除小鼠的腎臟AT1受體蛋白表達在顯著增加。我們設想多巴胺D4受體對AT1受體可能存在調(diào)節(jié)作用，并且，這種調(diào)節(jié)作用的失衡可能參與了高血壓的發(fā)生。
　　為驗證上述設想，本課題擬采用大鼠(Wistar-Kyoto，正常血壓)和自發(fā)性高血壓大鼠(Spontaneouslyhypertensiverat，SHR)腎臟RPT

4、細胞為研究對象，分析D4受體對AT1受體表達及功能的影響，區(qū)分在正常和高血壓狀態(tài)下的改變，初步探討多巴胺D4受體和AT1受體在高血壓發(fā)病中的作用。
　　主要研究內(nèi)容:
　　第一部分腎臟近曲小管多巴胺D4受體對AT1受體的作用:
　　1.確定多巴胺D4受體和AT1在RPT的共存情況。
　　2.以WKY大鼠RPT細胞為研究對象，分析不同濃度及處理時間的D4受體激動劑PD168077對細胞AT1受體蛋白表達的作用。

5、r>　　3.D4受體拮抗劑L745870檢測分析D4受體對RPT細胞AT1受體蛋白作用的特異性。
　　第二部分腎臟近曲小管多巴胺D4受體調(diào)節(jié)AT1受體的機制
　　1.初步討論多巴胺D4受體對AT1作用的分子機制和信號途徑，我們分別用PKC抑制劑19-31，Ca2+拮抗劑尼卡地平等驗證信號途徑。
　　第三部分高血壓狀態(tài)下多巴胺D4受體對AT1受體的蛋白表達和功能變化
　　1.利用D4受體激動劑PD168077分別作

6、用于WKY和SHR的RPT細胞，區(qū)別在正常狀態(tài)下和高血壓狀態(tài)下D4受體調(diào)節(jié)AT1受體作用差異。
　　2.研究PD168077及Ang-Ⅱ?qū)a+-K+-ATP酶活性作用在WKY和SHR大鼠RPT細胞的區(qū)別。
　　主要研究方法:
　　1.WKY大鼠和SHR大鼠的RPT細胞培養(yǎng)。
　　2.分別用免疫印跡法測定多巴胺D4受體調(diào)節(jié)AT1受體作用和機制
　　3.激光共聚焦顯微鏡測定確定多巴胺D4受體和AT1在RPT的

7、共存情況
　　4.用酶活性方法測定多巴胺D4受體調(diào)節(jié)AT1受體作用的功能。
　　主要研究結(jié)果:
　　1.D4受體和AT1受體在WKYRPT細胞共存。D4受體可抑制WKY大鼠RPT細胞AT1受體蛋白表達，該作用呈濃度依賴性;并同時呈時間依耐性，D4對AT1受體抑制作用可被D4阻斷劑L745870所阻斷，提示該抑制作用是通過D4受體完成。
　　2.結(jié)果提示尼卡地平(10-8mol/L)和PKC阻斷劑存在的情況下，D4

8、受體對AT1受體蛋白抑制作用被阻斷提示該抑制作用可能是通過鈣通道-PKC途徑。
　　3.D4受體可抑制WKY大鼠RPT細胞AT1受體蛋白表達，但在SHR的RPT細胞中此作用受損，表現(xiàn)為AT1受體蛋白表達上調(diào);D4受體對Ang-Ⅱ誘導的Na+-K+-ATP酶活性升高具有抑制作用，這種作用卻在SHRRPT細胞中受損。
　　結(jié)論
　　腎臟多巴胺D4受體對RPT細胞AT1受體表達及功能有抑制作用，該作用可能經(jīng)由鈣離子-PKC通