黃角顆粒對(duì)神經(jīng)細(xì)胞損傷的保護(hù)作用及其機(jī)制的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、目的：黃角顆粒是武漢市一醫(yī)院治療中風(fēng)急性期痰熱腑實(shí)證的經(jīng)驗(yàn)方，臨床觀察療效確切，動(dòng)物實(shí)驗(yàn)也證實(shí)其有改善血液流變學(xué)、拮抗凋亡的作用，本試驗(yàn)旨在從離體細(xì)胞水平探討黃角顆粒含藥血清對(duì)神經(jīng)細(xì)胞(SH-SY5Y)缺血缺氧損傷模型是否具有保護(hù)作用；并尋找其具有神經(jīng)保護(hù)作用的最佳藥物血清濃度；在最佳藥物血清濃度下進(jìn)一步證實(shí)黃角顆粒含藥血清對(duì)缺血缺氧神經(jīng)細(xì)胞保護(hù)作用的機(jī)制，在于其對(duì)缺血缺氧細(xì)胞凋亡的抑制作用。 方法： 1.實(shí)驗(yàn)動(dòng)物分組后

2、分別灌胃給藥采血，制備黃角顆粒含藥血清和空白對(duì)照血清。 2.連續(xù)培養(yǎng)的人神經(jīng)母細(xì)胞瘤細(xì)胞株(SH-SY5Y)細(xì)胞的培養(yǎng)及傳代，復(fù)制神經(jīng)細(xì)胞缺血缺氧模型并分別用不同的血清和不同的血清藥物濃度進(jìn)行干預(yù)。 3.用MTT微量比色法檢測(cè)細(xì)胞活性，比較不同的血清對(duì)細(xì)胞的保護(hù)作用和不同的濃度的血清對(duì)細(xì)胞的保護(hù)作用的差別。 4.用AnnexinV/PI雙標(biāo)記法流式細(xì)胞技術(shù)，在最佳血清藥物濃度下檢測(cè)細(xì)胞凋亡。 結(jié)果：

3、 1.缺氧造模致使神經(jīng)細(xì)胞損傷在10％黃角顆粒血清和10％空白對(duì)照血清兩組的缺氧培養(yǎng)與正常培養(yǎng)的比較中，缺血缺氧培養(yǎng)的細(xì)胞的活性顯著低于正常培養(yǎng)組(P<0.01)，說(shuō)明在經(jīng)歷了15Min的無(wú)血清、缺氧造模培養(yǎng)后細(xì)胞活性下降，部分神經(jīng)元死亡。 2.黃角顆粒對(duì)神經(jīng)細(xì)胞損傷的保護(hù)作用在10％的黃角顆粒含藥血清和空白對(duì)照血清對(duì)缺血缺氧神經(jīng)細(xì)胞的保護(hù)作用的比較中，以(OD正常培養(yǎng)組-OD缺氧培養(yǎng)組)/OD正常培養(yǎng)組計(jì)算細(xì)胞的死亡率，黃角

4、顆粒含藥血清組的細(xì)胞死亡率明顯低于空白對(duì)照組(P<0.01)，證實(shí)了其降低細(xì)胞死亡率的神經(jīng)保護(hù)作用。 3.不同血清濃度梯度的神經(jīng)保護(hù)作用的比較用5％、10％、20％、40％各不同濃度的含藥血清對(duì)缺氧細(xì)胞進(jìn)行干預(yù)的比較中，以20％組、40％組的保護(hù)作用顯著優(yōu)于其他組(P<0.05)，但是這兩組之間沒(méi)有顯著區(qū)別(P>0.05)，提示黃角顆粒發(fā)揮神經(jīng)保護(hù)作用的最佳血清濃度是20％。 4.黃角顆粒對(duì)神經(jīng)細(xì)胞凋亡的抑制作用用最佳血

5、清濃度20％的黃角顆粒血清和空白對(duì)照血清分別對(duì)缺氧造模細(xì)胞進(jìn)行干預(yù)后，用AnnexinV-FITC/PI雙標(biāo)記法流式細(xì)胞儀對(duì)細(xì)胞的凋亡進(jìn)行定量檢測(cè)。流式細(xì)胞儀分析結(jié)果顯示經(jīng)歷了15Min短暫的缺氧培養(yǎng)造模細(xì)胞的損傷的形式包括壞死和凋亡，凋亡是其死亡的重要形式；與同濃度的空白血清相比，黃角顆粒含藥血清組細(xì)胞的凋亡率明顯下降，說(shuō)明對(duì)黃角顆粒神經(jīng)細(xì)胞缺血缺氧的保護(hù)作用在于減少細(xì)胞的凋亡。 結(jié)論: 1.與空白對(duì)照血清相比黃角顆粒