新生大鼠缺血缺氧腦損傷早期認(rèn)知功能改變及藥物干預(yù).pdf

1、目的：探討新生大鼠缺血缺氧腦損傷后早期認(rèn)知功能改變，誘導(dǎo)型一氧化氮合酶(iNOS)和神經(jīng)黏附分子(NCAM)的作用以及芹菜素和神經(jīng)節(jié)苷酯GM1對(duì)認(rèn)知功能的影響。 方法：根據(jù)改良Rice模型建立新生大鼠缺血缺氧腦損傷模型。90只動(dòng)物稱重、記錄性別后，隨機(jī)分為假手術(shù)組(Sham-operated，SH)、模型組(Model，M)、芹菜素組(Apigenin，A)和神經(jīng)節(jié)苷脂GM1對(duì)照組(Ganglioside-GM1，GM1)。各組

2、按鼠齡不同又分為21日齡組和31日齡組。SH組不給藥，A組、M組和GM1組于缺血缺氧后分別每日腹腔注射等體積芹菜素、生理鹽水與二甲基亞砜混合液、GM1，連續(xù)10天。21日齡組或31日齡組大鼠在水迷宮中分別測(cè)試逃避潛伏期(空間定位學(xué)習(xí))、穿臺(tái)次數(shù)及臺(tái)周活動(dòng)的時(shí)間和路程(空間記憶)。各組腦切片后免疫組化染色觀察大鼠皮層iNOS與海馬NCAM的表達(dá)、電鏡及尼氏染色觀察腦組織細(xì)胞形態(tài)及尼氏小體定量-神經(jīng)細(xì)胞活力分析。所有數(shù)據(jù)進(jìn)行正態(tài)性檢驗(yàn)，多組

3、間的比較采用單因素方差分析，方差齊者用LSD檢驗(yàn)，方差不齊者用Dunnett'T3檢驗(yàn)，兩獨(dú)立樣本間比較采用t檢驗(yàn)，率的比較采用卡方檢驗(yàn)，相關(guān)分析采用Pearson直線相關(guān)。 結(jié)果： 1.動(dòng)物死亡率：M組死亡率與SH組比較，有顯著性差異(P＜0.05)；A組和GM1組分別與M組、SH組比較，均無顯著性差異(P＞0.05)。 2.模型病理觀察 (1)腦組織肉眼觀：29只缺血缺氧腦損傷大鼠腦組織呈現(xiàn)明顯的腦萎

4、縮改變，約占51.8％(29/56)。假手術(shù)組大鼠無腦組織萎縮。 (2)細(xì)胞形態(tài)光鏡觀察：右大腦皮層尼氏染色SH組的神經(jīng)元細(xì)胞豐富且排列整齊有序，間質(zhì)均勻；M組可見明顯的膠質(zhì)細(xì)胞增生，神經(jīng)元排列不規(guī)則；A組和GM1組神經(jīng)元細(xì)胞排列欠規(guī)則，較多見膠質(zhì)細(xì)胞。 (3)尼氏小體定量-神經(jīng)細(xì)胞活力分析：右大腦皮層M組、A組GM1組較相應(yīng)SH組活力下降，有顯著性差異(A21組、M21組，M31組，P＜0.01；GM1-21組，P＜0

5、.05)；31日齡組較21目齡組升高，各組均有顯著性差異(P＜0.01)。 (4)電鏡觀察：缺血側(cè)海馬組織SH組神經(jīng)細(xì)胞結(jié)構(gòu)正常，突觸前膜內(nèi)少見線粒體，其余各組神經(jīng)細(xì)胞有不同程度核固縮表現(xiàn)及內(nèi)質(zhì)網(wǎng)擴(kuò)張等，海馬突觸內(nèi)見較多線粒體。 3.Morris水迷宮實(shí)驗(yàn) (1)空間定位學(xué)習(xí)：平均逃避潛伏期，M組明顯落后于SH組，M21組較SH21組長(zhǎng)，有顯著性差異(P＜0.01)；A21組較M21組短，有顯著性差異(P＜0.0

6、5)；GM1組與M組比較，無顯著性差異(P＞0.05)；31日齡組較相應(yīng)21日齡組短，有顯著性差異(P＜0.01或＜0.05)。 (2)空間記憶：平均穿臺(tái)次數(shù)，A21組較GM1-21組多，有顯著性差異(P＜0.05)；GM1-31組較GM1-21多，有顯著性差異(P＜0.05)。平均臺(tái)周Ⅰ區(qū)時(shí)間，A31組較A21組長(zhǎng)(P＜0.05)。平均臺(tái)周Ⅰ區(qū)路程，GM1-31組較GM1-21組長(zhǎng)(P＜0.01)、A31組較A21組長(zhǎng)(P＜0

7、.05)。 4.腦皮層iNOS表達(dá)：A21組、GM1-21組和SH21組較相應(yīng)M組表達(dá)減少，均有顯著性差異(P＜0.01或P＜0.05)；SH31組和A-31組較M31組表達(dá)減少，有顯著性差異(P＜0.01或P＜0.05)；M31組和M21組、A31組和A21組比較表達(dá)增多，均有顯著性差異(P＜0.05)。 5.海馬NCAM表達(dá)：A組、GM1組與M組比較，無顯著性差異(P＞0.05)；31日齡組較相應(yīng)21日齡組表達(dá)增多，

8、均有顯著性差異(P＜0.05)。 6.相關(guān)分析：大鼠空間定位學(xué)習(xí)平均逃避潛伏期時(shí)間與最終體重呈負(fù)相關(guān)(r=-0.627，P＜0.01)，與出生體重?zé)o明顯相關(guān)；與皮層iNOS表達(dá)呈正相關(guān)(r=0.396，P＜0.01)、與海馬NCAM表達(dá)呈負(fù)相關(guān)(r=-0.415，P＜0.01)。海馬NCAM表達(dá)與皮層iNOS表達(dá)呈負(fù)相關(guān)(r=-0.340，P＜0.01)。 7.雌雄性別對(duì)空間定位學(xué)習(xí)、記憶能力及體重增長(zhǎng)率的影響差異均無顯

9、著性(P＞0.05)。 結(jié)論： 1.大鼠31日齡組較21日齡組具有較好的空間定位學(xué)習(xí)能力(平均逃避潛伏期縮短)，分別與日齡、最終體重及海馬NCAM表達(dá)呈正相關(guān)，無性別差異。 2.新生期缺血缺氧腦損傷大鼠有較高的死亡率，21日齡組神經(jīng)細(xì)胞活力減低、空間定位學(xué)習(xí)能力下降，后者與皮層iNOS表達(dá)呈正相關(guān)。 3.芹菜素可改善新生期缺血缺氧腦損傷大鼠21日齡組的空間定位學(xué)習(xí)能力，未發(fā)現(xiàn)GM1有明顯改善大鼠空間定位學(xué)