大豆低聚糖和低聚肽調(diào)節(jié)大鼠血脂作用的研究.pdf

1、心腦血管疾病已成為危害人類(lèi)健康的主要疾病，而脂質(zhì)代謝異常，特別是血膽固醇水平升高是基本易患因素。如何有效調(diào)節(jié)血脂，是目前營(yíng)養(yǎng)學(xué)研究的熱點(diǎn)之一。心腦血管疾病的病理基礎(chǔ)是動(dòng)脈粥樣硬化(atherosclerosis，AS)，而脂類(lèi)代謝與心血管疾病密切相關(guān)，脂質(zhì)代謝紊亂所致的AS是引起心腦血管疾病發(fā)生、發(fā)展的重要危險(xiǎn)因素。 高脂血癥往往伴有血液高凝狀態(tài)。研究表明內(nèi)皮細(xì)胞損傷和內(nèi)皮功能紊亂極大地參與了AS形成過(guò)程，血漿中高水平的低密度脂

2、蛋白(lowdensitylipoprotein，LDL)，尤其是氧化修飾的LDL(oxidizedLDL，OX-LDL)可使內(nèi)皮細(xì)胞發(fā)生輕度損傷，使致AS脂蛋白易于進(jìn)入內(nèi)皮下沉積；內(nèi)皮功能障礙會(huì)引起血管舒張因子和血管收縮因子的平衡破壞，導(dǎo)致血管舒縮異常，加速血管壁損傷和AS形成。 脂質(zhì)過(guò)氧化在AS病變的發(fā)生中起著重要作用，研究表明其主要原因是脂質(zhì)過(guò)氧化能引起內(nèi)皮細(xì)胞的收縮和形態(tài)結(jié)構(gòu)的損傷，同時(shí)脂質(zhì)過(guò)氧化物(lipidperox

3、ide，LPO)的生成使細(xì)胞膜的脂質(zhì)成分發(fā)生變化，并可導(dǎo)致細(xì)胞膜內(nèi)酶與蛋白質(zhì)的變性，從而破壞細(xì)胞結(jié)構(gòu)與功能。因此，脂質(zhì)過(guò)氧化對(duì)機(jī)體損傷的研究日益得到人們的關(guān)注。 大豆低聚糖(soyoligosaccharides,SOS)和大豆低聚肽(soyoligopeptides,SOP)是近年從大豆中分別提取的兩種具有多種生物活性的物質(zhì)。有研究發(fā)現(xiàn)SOP通過(guò)降低血清總膽固醇(totalcholesterol，TC)和甘油三酯(trigly

4、cerol，TG)濃度而具有調(diào)節(jié)血脂活性。另有研究發(fā)現(xiàn)SOP對(duì)羥自由基OH·具有清除作用，還能促進(jìn)膽固醇在腸道中的降解。推測(cè)SOP可能是自由基捕捉劑，通過(guò)抗氧化作用以及調(diào)節(jié)膽固醇在體內(nèi)的代謝而具有降血脂作用。低聚糖調(diào)節(jié)血脂的功能已有報(bào)道，但國(guó)內(nèi)外研究多關(guān)注于低聚果糖和菊粉兩種低聚糖降低膽固醇的作用，對(duì)SOS在該方面的研究較少，尤其對(duì)SOS和SOP聯(lián)合組方用于調(diào)節(jié)血脂未見(jiàn)文獻(xiàn)報(bào)道。有資料表明SOS在調(diào)節(jié)腸道功能方面顯示出強(qiáng)大的增殖雙歧桿菌

5、(bifidobacterium)活性，SOP也是腸道雙歧桿菌生長(zhǎng)必要的營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)，可促進(jìn)雙歧桿菌增殖。 基于以上分析，結(jié)合國(guó)內(nèi)外研究進(jìn)展，本課題以高脂膳食(飼料)誘發(fā)的高脂血癥大鼠為模型，觀察SOS和SOP對(duì)大鼠血清脂質(zhì)、脂蛋白以及載脂蛋白(apolipoprotein，apo)A、B、C、E的影響，同時(shí)通過(guò)對(duì)血漿前列腺(環(huán))素(prostacyclin，PGI2)、血栓素A2(thromboxaneA2，TXA2)、一氧化氮(

6、nitricoxide，NO)、超氧化物歧化酶(superoxidedismutase，SOD)、丙二醛(maleicdialdehyde，MDA)、糞膽酸等測(cè)定，從血管內(nèi)皮細(xì)胞活性物質(zhì)、血液流變學(xué)、抗氧化活性的影響以及膽固醇代謝途徑方面進(jìn)一步探討SOS和SOP干預(yù)在AS防治中的相關(guān)機(jī)制，特別是復(fù)合干預(yù)對(duì)高脂大鼠脂質(zhì)代謝的影響。本實(shí)驗(yàn)選用60只健康成年雄性SD大鼠(體重200±10g)，隨機(jī)分為5組：分別飼喂正常飼料(正常對(duì)照組NCG)

7、，高脂飼料(高血脂模型組HCG)，高脂飼料+2％SOS(SOS組)、高脂飼料+3％SOP(SOP組)、高脂飼料+2％SOS+3％SOP(SOSP組)。每組12只，實(shí)驗(yàn)期8w。分別于實(shí)驗(yàn)的中、末期，大鼠在禁食12h后，經(jīng)眼眶靜脈叢和股靜脈取血，制備血清和血漿，并于實(shí)驗(yàn)?zāi)┢谔幩来笫?，取肝臟進(jìn)行病理切片觀察。本實(shí)驗(yàn)用酶法測(cè)定了大鼠血清TC、TG、VLDL-TG、LDL-C和HDL-C水平，用免疫比濁法測(cè)定了血清apoAI、B、C、E含量；并利

8、用冰凍切片和油紅O染色技術(shù)在光鏡下觀察了大鼠肝臟的脂滴沉積情況。在確定SOS和SOP對(duì)高脂血癥大鼠血脂的調(diào)節(jié)作用后，進(jìn)一步探討其抗AS及對(duì)心血管保護(hù)的作用機(jī)制，用放射免疫法測(cè)定血漿PGI2和TXA2含量和硝酸還原酶法測(cè)定血漿NO含量，同時(shí)對(duì)高、低切全血粘度(viscosityofwholeblood，WBV)、血漿粘度(plasmaspecificviscosity，PSV)、血液還原粘度(bloodreducedviscosity，B

9、RV)和紅細(xì)胞壓積(hematocrit，HCT)進(jìn)行測(cè)定，以觀察其對(duì)血管內(nèi)皮細(xì)胞活性物質(zhì)及血液流變學(xué)影響；應(yīng)用黃嘌呤氧化酶法對(duì)大鼠血清和肝臟SOD活性進(jìn)行測(cè)定，以及硫代巴比妥酸(thiobarbituricacid，TBA)法對(duì)大鼠血清和肝臟MDA含量進(jìn)行測(cè)定，以了解SOS和SOP對(duì)LPO形成的影響及其抗氧化作用。于實(shí)驗(yàn)中、末期分別收集大鼠三天糞便，經(jīng)真空冷凍干燥后用磷鉬酸比色法測(cè)定了糞便中膽汁酸含量，以觀察SOS和SOP對(duì)膽固醇在體

10、內(nèi)代謝的影響。 主要實(shí)驗(yàn)結(jié)果和結(jié)論如下： 1.在大鼠飼料配方中分別添加10％豬油，2％膽固醇和1％膽鹽，以建立內(nèi)源性和外源性相混合的高膽固醇血癥，并以?xún)?nèi)源性為主。通過(guò)實(shí)驗(yàn)中期檢測(cè)大鼠血清脂質(zhì)水平，結(jié)果顯示飼喂高脂飼料大鼠血清TC、TG水平均顯著增高，提示高脂血癥大鼠造模成功。 2.在膳食中添加2％SOS和3％SOP干預(yù)后，各實(shí)驗(yàn)組均能顯著降低高脂血癥大鼠血清TG、TC、VLDL-TG和LDL-C并同時(shí)顯著升高HD

11、L-C水平，有效降低AI值；顯著降低血漿apoB、C、E并同時(shí)升高apoAI，有效降低apoB/apoAI比值，而2％SOS和3％SOP的復(fù)合干預(yù)效果明顯增強(qiáng)。提示SOS和SOP通過(guò)對(duì)血中脂質(zhì)、脂蛋白、apo水平的影響，可有效促進(jìn)機(jī)體脂質(zhì)代謝，調(diào)節(jié)血脂紊亂。 3.高脂血癥能明顯影響血管內(nèi)皮細(xì)胞活性物質(zhì)的生成，而SOS和SOP可顯著降低血漿TXA2含量和TXA2/PGI2比值，提高大鼠血漿PGI2和NO含量，以復(fù)合干預(yù)效果最為明顯

12、，提示SOS和SOP能調(diào)節(jié)TXA2/PGI2平衡，改善血管內(nèi)皮功能，有利于AS和CHD的預(yù)防。 4.SOS和SOP能明顯改善大鼠血液流變學(xué)，可降低動(dòng)物H-WBV、L-WBV、PSV、BRV和HCT，以聯(lián)合干預(yù)效果最佳。提示SOS和SOP通過(guò)提高紅細(xì)胞變性能力，降低紅細(xì)胞聚集性來(lái)改變血液的粘滯狀態(tài)，從而達(dá)到降低血液粘度，有效預(yù)防血中脂質(zhì)在動(dòng)脈壁的沉積。 5.實(shí)驗(yàn)各組較HCG組大鼠體內(nèi)MDA含量顯著降低，而對(duì)SOD活性無(wú)明顯

13、影響，提示SOS和SOP本身作為抗氧化劑可有效減少LPO形成，以及通過(guò)提高血漿HDL水平、減少體內(nèi)OX-LDL含量來(lái)達(dá)到抗氧化作用可能是其有效調(diào)節(jié)血脂紊亂，抗AS以及預(yù)防心血管疾病的機(jī)制之一。 6.SOS和SOP通過(guò)增加糞膽酸的排泄來(lái)促進(jìn)體內(nèi)膽固醇代謝，以復(fù)合干預(yù)效果最佳。提示SOS和SOP可能通過(guò)增殖雙歧桿菌，減少膽汁酸腸肝循環(huán)并負(fù)反饋增加7α-羥化酶活性以及肝臟低密度脂蛋白受體(lowdensitylipoproteinre

14、cepter，LDLR)活性，促進(jìn)血漿中膽固醇向膽汁酸的轉(zhuǎn)化是其降低血清膽固醇水平的機(jī)制之一。 綜上所述，SOS和SOP能顯著降低血清TC、TG、VLDL-TG、LDL-C并升高HDL-C水平，有效降低AI值；顯著降低血漿apoB、apoC、apoE并升高apoAI含量，有效降低apoB/apoAI值，具有調(diào)節(jié)血脂紊亂作用。通過(guò)抗脂質(zhì)過(guò)氧化，減少M(fèi)DA生成；通過(guò)促進(jìn)糞膽酸排泄，有效調(diào)節(jié)體內(nèi)膽固醇代謝；通過(guò)改善血管內(nèi)皮細(xì)胞活性物質(zhì)