重氮衍生化試劑的合成及其在LC-MS-MS法測(cè)定前列腺素含量中的應(yīng)用.pdf

1、前列腺素含量測(cè)定方法已經(jīng)被大量報(bào)道，主要的方法包括HPLC，GC-MS，EIA，RIA， LC-MS等。其中不乏高靈敏度的方法，但在實(shí)際應(yīng)用中發(fā)現(xiàn)很多缺點(diǎn)，如結(jié)構(gòu)類似的前列腺素交叉反應(yīng)，樣品前處理太過復(fù)雜，分析時(shí)間過長(zhǎng)以及回收率較低等。因而對(duì)前列腺素分析方法的優(yōu)化始終是一個(gè)需要解決的重要問題。
　　通過比較已報(bào)道的前列腺素檢測(cè)技術(shù)和樣品前處理技術(shù)的優(yōu)缺點(diǎn)，本項(xiàng)研究工作建立了柱前衍生化結(jié)合高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜測(cè)定生物樣品中的前列腺

2、素E2的分析方法。
　　本項(xiàng)研究設(shè)計(jì)并首次合成了適合質(zhì)譜檢測(cè)的具有高離子化效應(yīng)的前列腺素衍生化試劑——4-吡啶重氮甲烷。其合成路線是4-(氨基甲基)吡啶經(jīng)磺酰化、氧化，最后在強(qiáng)堿作用下分解制得。通過比較反應(yīng)物不同配比、溶劑、反應(yīng)溫度以及時(shí)間等，探索出較好的合成條件和合成工藝。合成產(chǎn)物經(jīng)核磁共振(NMR)、質(zhì)譜(MS)和紅外(IR)進(jìn)行結(jié)構(gòu)確認(rèn)，與所設(shè)計(jì)的結(jié)構(gòu)相符。
　　優(yōu)化了生物樣本的固相萃取方法，比較了不同洗脫劑的洗脫效果

3、，確定了前列腺素與所合成的衍生化試劑4-吡啶重氮甲烷的化學(xué)反應(yīng)條件等。最終所建立的分析方法如下：腦組織勻漿液經(jīng)C18固相萃取小柱純化，乙醚洗脫，40℃水浴與4-吡啶重氮甲烷反應(yīng)10 min，高效液相色譜分離，質(zhì)譜檢測(cè)；液相色譜流動(dòng)相為甲醇-10 mmol/L乙酸銨水溶液（75:25，v/v），流速0.2 ml/min；質(zhì)譜采用電噴霧電離源，多離子反應(yīng)監(jiān)測(cè)方式進(jìn)行檢測(cè)；分析物荷質(zhì)比為444→110。結(jié)果表明，前列腺素E2在0.65 pmo