大鼠KIAA0280在急性腦缺血中的差異表達(dá)及其轉(zhuǎn)基因細(xì)胞株的建立.pdf

1、　　本實驗室在前面的研究中利用熒光差異顯示RT-PCR(FDDRT-PCR)技術(shù)研究了大鼠急性腦缺血中缺血與非缺血腦區(qū)差異表達(dá)的基因。其中有一條在缺血區(qū)上調(diào)較明顯，經(jīng)克隆測序和同源性分析后發(fā)現(xiàn)該基因與人和小鼠KIAA0280基因相似性較高，因而將其命名為大鼠KIAA0280基因?！　樘剿鞔笫驥IAA0280是否參與缺血性腦損傷的病理生理過程并發(fā)揮作用，以及其機(jī)制。本研究首先利用MCAO模型，在mRNA水平確認(rèn)了大鼠KIAA0280在

2、缺血區(qū)的上調(diào)表達(dá)，經(jīng)序列比對推測己報道的小鼠mKIAA0280序列有誤并在WesternBlot檢測中得到證實；從蛋白水平分析了大鼠KIAA0280在正常雌性大鼠中的組織表達(dá)譜，發(fā)現(xiàn)該蛋白在正常大鼠的胰腺、胸腺、大腦皮層、小腦等組織表達(dá)量較高，而在腎、小腸、胃等組織則表達(dá)量較低；構(gòu)建了真核表達(dá)載體pcDNA3.1(-)-KIAA0280，并利用脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染法將其轉(zhuǎn)染至PC12細(xì)胞，建立了穩(wěn)定表達(dá)的細(xì)胞系，為以后的功能研究奠定了良好的基礎(chǔ)。

3、　　第1章大鼠KIAA0280cDNA的克隆及其表達(dá)研究　　結(jié)論:大鼠KIAA0280可能參與了腦缺血的病理生理過程；推測小鼠mKIAA0280報道序列有誤；KIAA0280在大鼠胸腺、大腦皮層、小腦、胰腺等組織表達(dá)量較高。 第2章pcDNA3.1(-)-KIAA0280真核表達(dá)載體的構(gòu)建及其在PC12穩(wěn)定表達(dá)細(xì)胞株的建立　　驗證了大鼠KIAA0280基因的存在和表達(dá)，但其功能并未得到證實。本研究擬構(gòu)建該基因的重組表達(dá)載體