不同用量刺蒺藜對(duì)小鼠毛囊黑皮素1受體表達(dá)的影響.pdf

1、研究背景與目的: 色素代謝障礙性皮膚疾?。ㄈ琰S褐斑、白癜風(fēng)），發(fā)病率高，嚴(yán)重影響患者的生活質(zhì)量，臨床缺乏理想療效的關(guān)鍵是有關(guān)色素調(diào)節(jié)的影響因素、作用機(jī)理與規(guī)律未能得到深入的科學(xué)闡述。黑皮素（melanocortin）是來(lái)源于前體阿黑皮素（POMC）的神經(jīng)肽類激素，包括a-MSH、ACTH等，主要在腦垂體中產(chǎn)生。皮膚源性黑皮素神經(jīng)肽激素主要是參與調(diào)控皮膚的色素沉著過(guò)程，而這種作用又主要是通過(guò)MC-1R介導(dǎo)[1]。MC-1R是黑素細(xì)

2、胞合成優(yōu)黑素、暗黑素的關(guān)鍵調(diào)節(jié)物，是調(diào)控皮膚色素沉著的重要基因[2]。在這過(guò)程中，酪氨酸酶又是色素合成的關(guān)鍵限速酶。MC-1R的激活或者高表達(dá)會(huì)使酪氨酸酶的合成增加，從而使黑素合成增加。中醫(yī)對(duì)色素病發(fā)病機(jī)制的認(rèn)識(shí)多是責(zé)之氣血失調(diào)，而提出調(diào)和氣血的治則，主要是祛風(fēng)與活血、補(bǔ)腎法則有機(jī)結(jié)合的方法。近年有關(guān)中醫(yī)藥與色素代謝障礙性疾病研究較多的是局限于觀察單味中藥對(duì)酪氨酸酶活性或黑素細(xì)胞增殖的影響，鮮有從MC-1R的角度對(duì)其色素代謝機(jī)制進(jìn)行闡明

3、，因而也較少具有實(shí)際應(yīng)用意義。我們以往的初步研究結(jié)果表明刺蒺藜具有雙向調(diào)節(jié)黑素細(xì)胞增殖和酪氨酸酶活性的作用，基于此，我們根據(jù)中醫(yī)臨床使用頻率高，對(duì)黑素代謝有調(diào)節(jié)作用的刺蒺藜進(jìn)行了有關(guān)色素代謝的一些研究，觀察不同用量刺蒺藜水提物對(duì)C57BL/6J小鼠毛囊MC-1R表達(dá)的影響，初步探討刺蒺藜在皮膚表皮黑素細(xì)胞活化和增殖過(guò)程中的作用；為臨床治療色素代謝障礙性皮膚病提供有效的用藥參考和實(shí)驗(yàn)依據(jù)。 方法與內(nèi)容: 48只C57BL/

4、6J小鼠，隨機(jī)分成4組，每組12只，分別為給予刺蒺藜水提液的3組實(shí)驗(yàn)組和給予蒸餾水的1組對(duì)照組，實(shí)驗(yàn)組小鼠預(yù)養(yǎng)2天后，于第3天開(kāi)始，刺蒺藜生藥材分上午9：00和下午16：00兩次連續(xù)給實(shí)驗(yàn)組小鼠灌服刺蒺藜水提液，兩次給小鼠灌胃各0.5ml，對(duì)照組為等量蒸餾水。于第30日上午給藥1小時(shí)后將4組小鼠3%戊巴比妥45mg/Kg腹腔麻醉，常規(guī)固定，剃除背毛，用組織剪剪取2cm×2cm大小皮膚，10%中性甲醛固定備用。 隨機(jī)在每組選擇相同

5、數(shù)量的標(biāo)本，脫蠟至水，抗原修復(fù)后，用鏈霉素抗生物素蛋白-過(guò)氧化物酶連接（S-P）常規(guī)染色法檢測(cè)MC-1R在表皮的陽(yáng)性表達(dá)情況，用緩沖液替代第一抗體做陰性對(duì)照，用已知陽(yáng)性切片作為陽(yáng)性對(duì)照。然后將標(biāo)本均用200倍顯微鏡下隨機(jī)選擇20個(gè)視野觀察表皮MC-1R陽(yáng)性細(xì)胞分布情況，并由JVC彩色攝像頭將細(xì)胞圖像輸入Mias系統(tǒng)拍照。 最后采用二級(jí)計(jì)分方法，對(duì)表達(dá)MC-1R的陽(yáng)性細(xì)胞進(jìn)行統(tǒng)計(jì)計(jì)分，以正常小黑鼠皮膚為對(duì)照，應(yīng)用SPSS13.0統(tǒng)

6、計(jì)軟件，各組標(biāo)本之間陽(yáng)性率采用秩和檢驗(yàn)的統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。對(duì)實(shí)驗(yàn)結(jié)果加以分析，均以α=0.05，P<0.05時(shí)判為有顯著性差異； 結(jié)果: MC-1的表達(dá)定位于表皮基底部黑素細(xì)胞、角質(zhì)形成細(xì)胞胞漿，為黃色或棕黃色顆粒，MC-1R在正常組小黑鼠皮膚毛囊中呈散在局灶性分布，在試驗(yàn)組呈局灶性或彌漫性分布，在表皮基底層形成棕褐色條帶。MC-1在不同用量刺蒺藜組和正常的小鼠毛囊皮片中均有陽(yáng)性表達(dá)，但MC-1R在試驗(yàn)組皮片中的表達(dá)與正常對(duì)

7、照組皮膚比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P=0.004<0.01：X2=13.515）且MC-1R在試驗(yàn)組較正常對(duì)照組表達(dá)明顯增強(qiáng)，試驗(yàn)組刺蒺藜用量越高表達(dá)越明顯，高劑量即刺蒺藜用量達(dá)225g時(shí)候表達(dá)最強(qiáng)（平均秩=34.21）。 全文結(jié)論: 1、本實(shí)驗(yàn)所設(shè)計(jì)低中高劑量刺蒺藜都能夠促進(jìn)MC-1R的表達(dá)水平。 2、中高低劑量刺蒺藜未發(fā)現(xiàn)能雙向調(diào)節(jié)黑皮素1受體的表達(dá)。 3、MC-IR在刺蒺藜作用下的表達(dá)可能是通過(guò)擴(kuò)增生