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文檔簡介
1、本文為了探討如何改善HIV-1膜蛋白作為疫苗抗原的免疫原性,對HIV-1 gp160進行改造將之截短為gp140和gp145,以降低其細胞毒性并改善免疫原性,所用毒株包括我國兩個主要流行株:B`亞型的RL-42和B`/C重組亞型的CN54;隨后,又對HIV-1<,cn54>的gp140和gP145進行了抗原修飾研究。 為了明確HIV-1膜蛋白gp140和gp145免疫原性的差異,分別構(gòu)建了2個DNA疫苗(svl40rl、sv14
2、5d)和2個重組天壇株痘苗(RTTV140rl、rTTV145rl),并采用初免-加強的免疫方式在小鼠體內(nèi)進行了免疫原性檢測。 免疫結(jié)束后,分離小鼠血清和脾細胞進行體液免疫檢測(Elisa、PLL-Elisa)和細胞免疫檢測(Elispot)。特異性T細胞反應(yīng)檢測結(jié)果顯示:gP 145初免能比gp140初免誘導(dǎo)更高T細胞免疫反應(yīng),但只有在單獨使用DNA疫苗進行免疫時,兩者之間才有顯著性差異。并且,在初免一加強策略中,最終的T細胞
3、反應(yīng)強弱主要取決于初免的效率。體液免疫檢測結(jié)果顯示:雖然各組小鼠,在血清特異性結(jié)合抗體滴度上沒有顯著性差異,但線性表位定位的結(jié)果卻提示gP145初免組的小鼠血清比gP140初免組的小鼠血清能識別更多的線性表位,并且這些表位與gp145比gP140多出的氨基酸序列無關(guān)。為了探討兩種抗原修飾方式對HIV-1<,cn54>gP140和gP145免疫原性的不同影響,先后構(gòu)建了6個DNA疫苗(sV140、sV145、sv140dG、sV140dV
4、、sv145dG、sv145dV)和6個重組天壇株痘苗(rTTV140、rTTV145、rTTV140dG、rTTV140dV、rTTV145dG、rTTV145dV)并運用初免-加強的免疫方式在小鼠體內(nèi)進行了免疫原性比較。實驗結(jié)果顯示:無論是在特異性結(jié)合抗體滴度方面,還是在細胞免疫方面,刪除環(huán)區(qū)均比突變掉糖基化位點顯示出更優(yōu)越的免疫原性。研究結(jié)果還顯示,改造對gP140和gP145誘導(dǎo)特異性細胞免疫反應(yīng)能力的影響是不同的:改造后的抗原
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