小鼠胚胎干細胞誘導的血管細胞聯(lián)合種植在PLGA上初步構建出血管組織.pdf

1、目的：在我們已有小鼠胚胎干細胞誘導且經過RT-PCR和免疫組化鑒定血管平滑肌細胞(VSMc)和內皮細胞(EC)種子細胞的基礎上，現(xiàn)在探索用誘導的內皮細胞和血管平滑肌細胞，聯(lián)合種植在經明膠浸潤處理的聚丙交酯/乙交酯(PLGA)靜電紡絲材料上，進行體外構建小管徑組織工程血管。 方法：①先將PLGA用1％明膠處理，并測量明膠浸潤處理前后PLGA的接觸角。②在明膠處理與否的PLGA片上種植血管平滑肌細胞，60分鐘后即用甲苯胺藍染色法觀察

2、材料對細胞的親和力：用MTT、掃描電鏡材料觀察經培養(yǎng)1天，3天后細胞在材料上的生長情況。③在片狀PLGA材料一側隔日種植血管平滑肌細胞1次，3天共2次，再于另外一側種植內皮細胞1次，并進行聯(lián)合培養(yǎng)2天后，作H&E和免疫組化檢查。④將聯(lián)合種植了血管平滑肌細胞和內皮細胞的PLGA裹成直經約1mm管狀包埋于4周齡的裸鼠皮下，分別于3天，1，3周取出進行HE染色和免疫組化檢查。⑤同時用放射免疫法測定單純種植1次血管平滑肌細胞的A組，單純種植內皮

3、細胞的B組，聯(lián)合種植了平滑肌和內皮細胞的c組這三組培養(yǎng)液中內皮素含量。 結果：①處理前的接觸角是88.5°，處理后61.5°。②甲苯胺藍染色見血管平滑肌細胞在材料上密集、均勻分布：掃描電鏡觀察到1小時細胞開始延展，1天開始長入孔隙中，3天呈多層分布，無序狀生長；MTT檢測支架上細胞在3天內的增殖情況等同于培養(yǎng)板。③H&E和免疫組化見材料兩側分別分布著血管平滑肌細胞和內皮。④包埋3周后材料結構仍存在，未被降解吸收。在材料周圍包裹結