抗菌肽Enbocin1基因在家蠶抵御白僵菌感染過程中表達(dá)特征及其抗真菌活性.pdf

1、白僵菌是家蠶重要的病原真菌，其感染家蠶引起的白僵病，往往對(duì)蠶桑業(yè)的生產(chǎn)造成巨大損失。目前，包括白僵菌在內(nèi)的真菌對(duì)家蠶的作用機(jī)理尚不明確。因此開展家蠶抗菌肽 enbocin1在抵御白僵菌感染過程中的功能研究，可解析家蠶對(duì)白僵菌感染免疫應(yīng)答反應(yīng)的分子機(jī)理，為從分子水平上闡明家蠶對(duì)白僵菌感染的防御機(jī)制和白僵菌對(duì)家蠶的致病機(jī)理提供新的實(shí)驗(yàn)依據(jù)。
　　用白僵菌分生孢子體表接觸感染家蠶P50五齡起蠶，隨機(jī)收集感染組和對(duì)照組幼蟲在感染后10個(gè)不

2、同時(shí)間點(diǎn)的血淋巴、體壁、馬氏管、脂肪體。用real-time PCR檢測(cè)了 enbocin1基因在血淋巴、體壁、馬氏管、脂肪體組織的時(shí)空表達(dá)模式，結(jié)果顯示 enbocin1基因主要在脂肪體中上調(diào)表達(dá)明顯，而且上調(diào)表達(dá)持續(xù)至誘導(dǎo)后30h，而在馬氏管、體壁中差異表達(dá)不顯著，在血淋巴中幾乎檢測(cè)不到enbocin1的表達(dá)，表明enbocin1對(duì)家蠶抵御白僵菌感染可能具有重要作用。
　　構(gòu)建了重組表達(dá)載體 PET-30a(+)-Enboci

3、n1，轉(zhuǎn)化感受態(tài)大腸桿菌 BL21（DE3），成功地誘導(dǎo)表達(dá)并用 Ni-NTA親和層析純化獲得了高純度的重組蛋白enbocin1，經(jīng)SDS-PAGE檢測(cè)蛋白大小與預(yù)期的一致，約10.8kDa。測(cè)得重組蛋白濃度為10mg/mL。經(jīng)抑菌試驗(yàn)表明其對(duì)白僵菌的生長(zhǎng)具有較強(qiáng)抑制作用。成功制備了抗enbocin1的多克隆抗體，可用于檢測(cè)enbocin1的表達(dá)，為進(jìn)一步深入研究enbocin1的功能及其機(jī)制奠定了基礎(chǔ)。
　　本研究可為闡明其他類