2023年全國碩士研究生考試考研英語一試題真題(含答案詳解+作文范文)_第1頁
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文檔簡介

1、目的:
  探討清熱化濕中藥(清胰化積方,QYHJ)抗胰腺癌過程中腫瘤相關(guān)成纖維細(xì)胞(CAFs)的作用。
  方法:
  第一部分,
  1.建立胰腺癌皮下移植瘤模型,分成QYHJ組和生理鹽水對(duì)照組,評(píng)價(jià)QYHJ對(duì)胰腺癌生長的影響。
  2.建立胰腺癌原位移植瘤模型,分成QYHJ組和生理鹽水對(duì)照組,評(píng)價(jià)QYHJ對(duì)胰腺癌肝轉(zhuǎn)移的影響。
  第二部分,
  1.家兔胃飼QYHJ獲取含中藥血清,并取正

2、常家兔血清為對(duì)照組。56℃水浴鍋,30分鐘,制備滅活的中藥血清及正常血清。
  2.CCK-8法測定正常血清、正常滅活血清、中藥血清、中藥滅活血清對(duì)人胰腺癌細(xì)胞體外增殖的影響,并繪制細(xì)胞增殖曲線。
  3.體外遷移及侵襲實(shí)驗(yàn)(Transwell)檢測正常血清、正常滅活血清、中藥血清、中藥滅活血清對(duì)人胰腺癌細(xì)胞體外遷移及侵襲能力的影響。
  第三部分,
  1.采用原代培養(yǎng)的方法建立兩對(duì)人胰腺正常成纖維細(xì)胞(NFs

3、)及對(duì)應(yīng)的腫瘤相關(guān)成纖維細(xì)胞(CAFs)。
  2.采用免疫熒光(ICC)及Western-blot對(duì)原代培養(yǎng)成的成纖維細(xì)胞進(jìn)行鑒定。
  3.采用RT-PCR、Western-blot技術(shù)檢測NFs、CAFs及經(jīng)含藥血清處理的CAFs之間CXCL1、2、8表達(dá)的差異。
  4.CCK-8法測定含中藥血清對(duì)CAFs體外增殖的影響。
  5.采用免疫組化技術(shù)評(píng)價(jià)QYHJ干預(yù)后CAFs在小鼠移植瘤中增殖能力的變化。<

4、br>  6.采用免疫組化及Elisa技術(shù)評(píng)價(jià)CAFs表達(dá)、分泌CXCL1、2、8能力的改變。
  第四部分,
  1.體外遷移及侵襲實(shí)驗(yàn)(Transwell)檢測CXCL1、2、8對(duì)人胰腺癌細(xì)胞遷移及侵襲能力的影響。
  2.體外成球?qū)嶒?yàn)檢測CXCL8/CXCR1對(duì)人胰腺癌細(xì)胞干性的影響。
  3.流式細(xì)胞技術(shù)檢測CXCL8/CXCR1對(duì)人胰腺癌干細(xì)胞比例的影響。
  4.免疫組化法檢測人體組織中CXCR

5、1與干細(xì)胞標(biāo)記物CD24/44/133的表達(dá)水平。
  5.統(tǒng)計(jì)分析CXCR1及CD24/44/133之間表達(dá)水平的相關(guān)性。
  6.統(tǒng)計(jì)臨床資料分析CXCR1表達(dá)水平與胰腺癌患者臨床特征之間的相關(guān)性。
  7.單因素及多因素分析CXCR1表達(dá)水平與胰腺癌患者預(yù)后的關(guān)系。
  第五部分,
  體外遷移及侵襲實(shí)驗(yàn)(Transwell)檢測NFs、CAFs及經(jīng)含中藥血清處理的CAFs上清對(duì)人胰腺癌細(xì)胞遷移及侵襲

6、能力的影響。
  結(jié)果:
  第一部分,
  在皮下移植瘤實(shí)驗(yàn)中,QYHJ組和Control組的成瘤率均達(dá)到100%。但Control組與QYHJ組之間腫瘤生長速度存在差異,中藥組經(jīng)過QYHJ干預(yù)后腫瘤的生長速度低于Control組,從QYHJ干預(yù)第15天開始兩組之間腫瘤的生長速度就出現(xiàn)了明顯差異(P<0.05)。第21天處死裸鼠,發(fā)現(xiàn)QYHJ組平均瘤重小于Control組,Control組和QYHJ組的瘤重分別為0.

7、705±0.198809g、0.435429±0.151751g,抑瘤率為38.24%(P<0.05)。在原位移植瘤實(shí)驗(yàn)中,QYHJ組原位移植瘤的體積明顯小于對(duì)照組,并且QYHJ組小鼠肝臟轉(zhuǎn)移灶的數(shù)目(P=0.042)及轉(zhuǎn)移率(P=0.002)也明顯少于對(duì)照組。提示QYHJ可以有效地抑制胰腺癌的增殖及轉(zhuǎn)移。
  第二部分,
  四組血清對(duì)人胰腺癌細(xì)胞系增殖、遷移及侵襲的抑制能力有顯著差異,從高到低分別為中藥組、正常、中藥滅活

8、組、正常滅活組。正常組高于正常滅活組,這可能和機(jī)體在正常情況下的免疫反應(yīng)有關(guān)。中藥滅活組高于正常滅活組,這可能和中藥有效成分本身對(duì)于胰腺癌細(xì)胞的直接作用有關(guān)。中藥組高于中藥滅活組,提示中藥抗胰腺癌存在間接作用,且這部分間接作用能夠有效地抑制胰腺癌的惡性潛能。
  第三部分,
  經(jīng)過原代培養(yǎng)建立起兩對(duì)(#1,#2)相應(yīng)的NFs和CAFs細(xì)胞,并選取上皮細(xì)胞標(biāo)記物人廣譜細(xì)胞角蛋白(Pan Cytokeration[AE1/AE

9、3],CK)、E-cadherin,間質(zhì)標(biāo)記物Vimentin及CAFs特異性標(biāo)記物α-SMA,通過免疫熒光(ICC)和Western-blot的方法對(duì)其進(jìn)行鑒定。結(jié)果顯示NFs和CAFs都不表達(dá)上皮細(xì)胞標(biāo)記物CK及E-cadherin,但都表達(dá)間質(zhì)標(biāo)記物Vimentin,CAFs還高表達(dá)其特異指標(biāo)α-SMA。提示我們成功建立起人胰腺NFs及胰腺癌CAFs。
  我們進(jìn)一步檢測了成纖維細(xì)胞分泌的CXCL家族的幾個(gè)因子的表達(dá)。結(jié)果顯

10、示CXCL1、2、8在CAFs中的表達(dá)明顯高于NFs,且在用QYHJ干預(yù)后CAFs中的CXCL1、2、8表達(dá)明顯下調(diào)。體內(nèi)免疫組化的結(jié)果也提示QYHJ組中CXCL1、2、8的陽性率明顯降低,進(jìn)一步檢測小鼠血清中CXCLs的含量,發(fā)現(xiàn)它們?cè)贑ontrol和QYHJ組中含量分別為57.49±5.07pg/L VS43.27±7.01pg/L(P<0.05);42.88±4.00 pg/L VS33.92±1.42pg/L(P<0.05);3

11、43.03±50.68 pg/L VS190.52±39.36 pg/L(P<0.05)。同時(shí)我們也觀察了QYHJ對(duì)CAFs增殖的影響,體外增殖實(shí)驗(yàn)中QYHJ組OD值明顯低于Control組,體內(nèi)的免疫組化結(jié)果提示QYHJ干預(yù)后Vimentin和α-SMA表達(dá)明顯下降,提示QYHJ能抑制CAFs的增殖。
  第四部分,
  在遷移和侵襲實(shí)驗(yàn)當(dāng)中CXCL1、2、8干預(yù)組中Capan1細(xì)胞的穿過數(shù)量都高于對(duì)照組和抑制劑組(P<0

12、.05)。成球?qū)嶒?yàn)中CXCL8組中干細(xì)胞球的數(shù)量明顯多于對(duì)照組(P=0.000),在加入抑制劑后CXCL8誘導(dǎo)的干細(xì)胞成球能力受到抑制(P=0.002)。在CXCL8誘導(dǎo)后Capan1干細(xì)胞比例明顯高于對(duì)照組(P=0.002)和抑制劑組(P=0.03)。
  臨床資料的分析結(jié)果顯示CXCR1和胰腺癌干細(xì)胞標(biāo)記物CD44/133表達(dá)呈正相關(guān),并且和胰腺癌淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移關(guān)系密切。同時(shí)CXCR1、CD44/133也和胰腺癌患者的預(yù)后相關(guān),C

13、XCR1是胰腺癌患者預(yù)后的一個(gè)獨(dú)立相關(guān)因素。
  第五部分,
  NFs組及QYHJ干預(yù)后的CAFs條件培養(yǎng)基組比CAFs條件培養(yǎng)基組Capan1細(xì)胞穿透數(shù)量更少(P<0.05)。
  結(jié)論:
  QYHJ可以有效地抑制胰腺癌細(xì)胞的增殖及遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移,它的這種作用除了本身有效成分之外,還存在間接作用,其中的一個(gè)間接靶點(diǎn)在于CAFs。QYHJ可以通過抑制CAFs的增殖以及抑制CAFs分泌CXCL1、2、8間接地達(dá)到抗胰

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