草地早熟禾原生質(zhì)體培養(yǎng)及體細(xì)胞雜交.pdf

1、草地早熟禾（PoaPratensisL.）屬冷季型草坪草，是溫帶地區(qū)重要的草坪草種之一，具有兼性無融合生殖特性。它具有色美、耐蔭、耐修剪、耐踐踏等優(yōu)點(diǎn)，常用于草坪和綠地的建植，但它也具有一些自身的缺點(diǎn)，如易受病蟲危害、不耐炎熱、耐高低溫能力差、抗旱力不強(qiáng)等。由于草地早熟禾兼性無融合生殖特性，利用常規(guī)的育種方法培育新品種受到了很大的限制。植物細(xì)胞工程和基因工程技術(shù)的發(fā)展為提高草地早熟禾的抗逆性提供了一條新途徑。本試驗(yàn)以3個草地早熟禾品種（

2、午夜2號、新格萊德和橄欖球2號）為材料，建立草地早熟禾愈傷組織再生系統(tǒng)，以此為基礎(chǔ)建立草地早熟禾原生質(zhì)體培養(yǎng)及不同品種間原生質(zhì)體融合等研究。 1.以草地早熟禾品種午夜2號、新格萊德和橄欖球2號成熟種子為外植體，進(jìn)行了植株再生的研究。結(jié)果表明： （1）午夜2號誘導(dǎo)愈傷組織的最佳培養(yǎng)基為MS+1mg/L2，4-D+0.1mg/L6-BA+3%蔗糖+0.7%瓊脂，其誘導(dǎo)率為52.3%；最佳繼代培養(yǎng)基為：MS+1mg/L2，4-

3、D+0.3mg/L6-BA+3%蔗糖+0.7瓊脂；最佳分化培養(yǎng)基為：MS+0.5mg/LNAA+1mg/L6-BA+3%蔗糖+0.6%瓊脂，分化率為57.5%。 （2）新格萊德誘導(dǎo)愈傷組織的最佳培養(yǎng)基為MB5+3mg/L2，4-D+0.5mg/L6-BA+3%蔗糖+0.7%瓊脂，其誘導(dǎo)率為75%；最佳繼代培養(yǎng)基為：MS+3mg/L2，4-D+0.5mg/L6-BA+3%蔗糖+0.7%瓊脂；最佳分化培養(yǎng)基為：MS+0.5mg/LN

4、AA+2mg/L6-BA+3%蔗糖+0.6%瓊脂，分化率為55%。 （3）橄欖球2號誘導(dǎo)愈傷組織的最佳培養(yǎng)基和最佳繼代培養(yǎng)基為MS+3mg/L2，4-D+0.1mg/L6-BA+3%蔗糖+0.7%瓊脂，其誘導(dǎo)率為80.5%；最佳分化培養(yǎng)基為：MS+0.5mg/LNAA+2mg/L6-BA+3%蔗糖+0.6%瓊脂，分化率為52.5%。 2.以草地早熟禾品種午夜2號、新格萊德和橄欖球2號成熟種子誘導(dǎo)的松軟胚性愈傷組織為材料，

5、以酶解法分離出原生質(zhì)體，進(jìn)行了原生質(zhì)體培養(yǎng)和植株再生。研究了不同酶液組成、酶解時間、愈傷組織繼代時間和滲透壓對草地早熟禾原生質(zhì)體游離及植株再生的影響。結(jié)果表明： （1）采用繼代培養(yǎng)8～10d的胚性愈傷組織在1.0%纖維素酶+1.0%離析酶+0.5%果膠酶+0.3%崩潰酶條件下，酶解14～16h可得到產(chǎn)量和活力較高的原生質(zhì)體。 （2）原生質(zhì)體在KM8P培養(yǎng)基中培養(yǎng)3d后出現(xiàn)第一次細(xì)胞分裂，2～3周后形成小細(xì)胞團(tuán)，此時添換0

6、.1mol/L～0.2mol/L甘露醇滲培養(yǎng)基2～3次，有利于小細(xì)胞團(tuán)持續(xù)分裂并形成愈傷組織。 （3）成功地獲得了草地早熟禾品種午夜2號和新格萊德原生質(zhì)體再生植株以及橄欖球2號原生質(zhì)體來源的愈傷組織。 3.利用PEG融合法對午夜2號和新格萊德的原生質(zhì)體進(jìn)行了融合，獲得了體細(xì)胞雜種愈傷組織。研究了預(yù)處理對親本原生質(zhì)體活力的影響和適宜的融合條件，結(jié)果表明： （1）用不同濃度的碘乙酰胺（IOA）處理新格萊德原生質(zhì)體，得