小麥花粉特異性基因TaPSG719啟動子的功能分析.pdf

1、本文對小麥花粉特異性基因TaPSG719啟動子啟動基因表達(dá)的組織特異性進(jìn)行了鑒定，在植物基因調(diào)控理論之啟動子研究方面取得了一定的進(jìn)展，同時為建立小麥雄性不育系奠定了理論基礎(chǔ)。
　　 在本實(shí)驗(yàn)室已克隆出來的小麥花粉特異性基因TaPSG719啟動子（Genbank序列號：FJ497025）的基礎(chǔ)上，本文采用PCR技術(shù)擴(kuò)增出TaPSG719啟動子的兩個片段，分別長1.0kb和1.7kb左右。這兩個片段插入T載體后，先后用限制性內(nèi)切酶B

2、am HI和 Hind III酶切，酶切產(chǎn)物分別與用同樣的限制性內(nèi)切酶處理后的質(zhì)粒pBI121的大片段相連接。由于質(zhì)粒pBI121攜帶GUS基因，成功構(gòu)建的質(zhì)粒載體分別命名為p1.0GUS和 p1.7GUS。將這兩個載體轉(zhuǎn)化農(nóng)桿菌，再利用農(nóng)桿菌介導(dǎo)轉(zhuǎn)化法將啟動子片段和報(bào)告基因GUS的融合基因?qū)霟煵?，組織培養(yǎng)獲得轉(zhuǎn)基因植株。提取再生植株葉片的全基因組DNA分別做相應(yīng)的啟動子片段和GUS基因的PCR擴(kuò)增以篩選轉(zhuǎn)基因陽性植株。篩選出轉(zhuǎn)基因植

3、株后對轉(zhuǎn)基因植株和陰性對照植株的根、莖、葉片、萼片、花瓣、花柱頭、未成熟花粉和成熟花粉進(jìn)行GUS組織染色。
　　 實(shí)驗(yàn)結(jié)果：①對載體p1.0GUS和 p1.7GUS的PCR檢測和隨后的測序結(jié)果表明載體構(gòu)建成功；②再生植株的PCR檢測結(jié)果表明融合基因已經(jīng)整合到煙草基因組中；③GUS組織染色后，陰性對照植株的各個組織都不顯藍(lán)色，陽性對照植株各個組織均為藍(lán)色，轉(zhuǎn)入啟動子片段和GUS融合基因的轉(zhuǎn)基因煙草中除花粉顯藍(lán)色外其余均不顯藍(lán)色；④