一株天鵝源小鵝瘟病毒的全基因序列分析及小鵝瘟病毒標準抗原抗體物質的制備.pdf

1、1.一株天鵝源小鵝瘟病毒的全基因序列分析
　　本研究利用鵝胚從江蘇某動物園送檢的病死天鵝病料中分離到一株小鵝瘟病毒，命名為GPV-XZ20150328，對該株病毒進行了全基因克隆測序，拼接后獲得了GPV-XZ20150328的全基因序列。將其與GenBank上己發(fā)表的GPV全基因序列和本實驗室分離的另一株天鵝源GPV全基因序列進行比較，結果顯示:GPV-XZ20150328株全長為5106bp，與歐洲標準B株基因序列全長相同，同源

2、性為97.7％，與天鵝源GPV-SHFX(5050bp)株的同源性達99.8％，但在末端重復序列其出現(xiàn)56個基因的插入，提示，GPV在不同個體和區(qū)域可能存在一定差異。
　　2.小鵝瘟病毒標準抗原物質的制備
　　本研究通過鵝胚接種擴增小鵝瘟病毒，用超速離心法進行純化，通過SDS-PAGE分析、直接透射電鏡觀察、血凝試驗、PCR特異性分析及滅活條件測定后，用聚乙二醇6000(PEG6000)濃縮法制得GPV濃縮抗原。結果表明，擴

3、增的病毒純度較高且無AIV、NDV、EDS76、MDPV、ALV、MDV、IBV、ILTV、IBDV、REV、DEV、TMUV等病毒的污染。滅活條件以0.3％β-丙內(nèi)酯作用48h最佳。制得的GPV濃縮抗原與特異性抗體反應的瓊擴效價為1∶4。將制備的濃縮抗原加入1％BSA凍存保護劑，分裝，凍干后經(jīng)物理性狀檢查、計算CV值、無菌檢驗、支原體檢驗、均一性、穩(wěn)定性、保質期等檢驗后獲得了高質量的標準抗原，可以用于相應檢測試劑的質量判別。
　

4、　3.小鵝瘟病毒標準抗體物質的制備
　　本研究采用口服和注射的途徑對雛鵝進行四次免疫后制各了抗小鵝瘟多抗血清。利用本實驗室保存的一株抗鵝細小病毒單克隆抗體雜交瘤細胞株(GPV-Mab-6C8)經(jīng)Bab/c小鼠制備出抗小鵝瘟單克隆抗體。用瓊脂擴散試驗檢測，該多抗血清的AGP效價為1∶64，用GPV細胞適應毒建立的免疫熒光檢測方法(IFA)檢測該血清，IFA效價為1∶6400，單抗的IFA效價為1∶1600。特異性鑒定結果表明制備的抗