小鵝瘟病毒VP-,3-基因疫苗在免疫雛鵝體內(nèi)動(dòng)態(tài)分布及表達(dá)規(guī)律的研究.pdf

1、本文圍繞小鵝瘟病毒(GPV)VP3基因檢測方法、GPV VP3基因疫苗及其GPV弱毒疫苗免疫雛鵝以后在機(jī)體分布及表達(dá)等開展了下列研究：①檢測小鵝瘟病毒(GPV)VP3基因的實(shí)時(shí)熒光定量PCR(FQ-PCR)的建；②將GPV-VP3基因疫苗(pcDNA-GPV-VP3)分別以每只200μg、100μg、50μg肌肉注射，6μg、3μg、1μg基因槍轟擊的方法免疫30日齡四川白鵝，然后用FQ-PCR和免疫組織化學(xué)的方法檢測在動(dòng)物體內(nèi)(心、肝

2、、脾、肺、腎、法氏囊、胸腺、哈氏腺、十二腸、空腸、回腸、直腸、盲腸、胰腺、血液、腦及注射部位皮膚)分布及表達(dá)規(guī)律；③將GPV弱毒疫苗以每只200μL肌肉注射免疫免疫30日齡四川白鵝做對照，比較其和GPV-VP3基因疫苗進(jìn)入機(jī)體后分布及表達(dá)的差異。獲得如下結(jié)果： 1．建立的FQ-PCR特異性強(qiáng)、靈敏度高、重復(fù)性好，核酸模板數(shù)與FQ-PCR測定的Ct值相關(guān)系數(shù)達(dá)到0．999，具有很好的直線相關(guān)性。 2．pcDNA-GPV-V

3、P3在雛鵝體內(nèi)的分布規(guī)律：各劑量免疫雛鵝1 h即可在各組織中被檢測到，其中免疫部位含量最高，其次是肝、腎、淋巴器官(脾、法氏囊、胸腺、哈氏腺)；到217d時(shí)，各組雛鵝各個(gè)組織器官內(nèi)仍檢測到pcDNA-GPV-VP3的存在，但多數(shù)組織器官中的含量比1h時(shí)約低了少了10<'3>-10<'4>，其中免疫部位減少了約10<'4>-10<'3>；血液中pcDNA-GPV-VP3的含量較少，1h比其他組織低10<'1>-10<'2>；隨后含量開始下

4、降，隨著時(shí)間的推移，pcDNA-GPV-VP3在各組織器官中含量的下降速度有變慢的趨勢，3d-21d約下降了10<'0.1>-10<'0.5>，到63d-217d含量僅下降了10<'0.5>-10<'1>：腦1h-12h含量呈上升趨勢，12h時(shí)達(dá)到最大值，隨后下降。 3．pcDNA-GPV-VP3在雛鵝體內(nèi)的表達(dá)規(guī)律：pcDNA-GPV-VP3的表達(dá)產(chǎn)物1d時(shí)能在免疫部位中的細(xì)胞質(zhì)中檢測到，基因槍組1d陽性顆粒最多，肌肉組時(shí)達(dá)到

5、最多，63d肌肉組免疫部位中仍能檢測到陽性顆粒，腸腺和腸絨毛上的杯狀細(xì)胞細(xì)胞質(zhì)/心肌細(xì)胞核也能檢測到較多陽性；肝細(xì)胞間質(zhì)中有零星表達(dá)，肺、腎、脾、胰腺、腦、法氏囊、胸腺中未見表達(dá)。 4．不同途徑免疫pcDNA-GPV-VP3后在雛鵝體內(nèi)的的分布和表達(dá)差異：不同途徑免疫后，pcDNA-GPV-VP3在雛鵝體內(nèi)廣泛分布，并在心、肝、腸道和免疫部位表達(dá)，在免疫早期，基因槍組中各組織中pcDNA-GPV-VP3的含量普遍大于肌肉注射組，

6、心、肝中棕黃色陽性顆粒出現(xiàn)比肌肉注射組早，但到217d時(shí)兩種免疫方式都未能檢測到表達(dá)產(chǎn)物。 5．不同劑量與分布和表達(dá)的關(guān)系：不同劑量pcDNA-GPV-VP3免疫雛鵝各組織中的含量和表達(dá)量呈現(xiàn)的總體規(guī)律為6μg組>3μg組>1μg組，200μg組>100μg組>50μg組，說明基因疫苗的劑量和分布、表達(dá)呈現(xiàn)一定的正相關(guān)性； 6．GPV弱毒疫苗在雛鵝體侵染和排泄：GPV弱毒疫苗免疫雛鵝后，病毒含量1h-3d呈現(xiàn)下降后回升的