B亞群禽白血病病毒分離株的生物學(xué)特性.pdf

1、禽白血病是由禽白血病病毒和禽肉瘤病病毒引起的禽類(lèi)多種腫瘤性疾病的統(tǒng)稱(chēng)。禽白血病病毒是在雞群中普遍存在的一群反轉(zhuǎn)錄病毒，該病毒可引起禽的多種具有傳染性的良性腫瘤和惡性腫瘤。根據(jù)在不同遺傳型雞胚成纖維細(xì)胞上的宿主范圍、與相同或不同亞群成員的干擾模式以及用病毒-清中和試驗(yàn)鑒定的病毒囊膜抗原，雞的禽白血病病毒可分為A、B、C、D、E和J共6個(gè)亞群。其中A、B、C、D主要引起經(jīng)典的淋巴樣白血病，而J亞群主要引發(fā)髓樣細(xì)胞瘤。在過(guò)去十年中，中國(guó)已對(duì)J

2、亞群ALV的流行狀況有了大量報(bào)道，由于中國(guó)在過(guò)去幾十年中從未對(duì)ALV采取過(guò)有效的凈化措施，中國(guó)雞群、尤其地方品系中存在其它亞型ALV感染的可能性很大。但對(duì)J亞群以外其它亞群ALV還很少有研究。
　　 1.B亞群ALV野毒株SDAU09C2的分離和鑒定
　　 本文通過(guò)接種DF-1細(xì)胞（C/E）系，從山東某地方品系蘆花雞的雞群中分離到一株外源性白血病病毒（ALV）SDAU09C2。根據(jù)GenBank中已發(fā)表不同亞群序列設(shè)計(jì)合

3、成7對(duì)連續(xù)、相互部分重疊的引物，完成了該外源性禽白血病病毒分離株SDAU09C2的前病毒全基因組核苷酸序列，并與A、B、C、D、E、J亞群參考毒株進(jìn)行了同源性分析。分析結(jié)果表明，該分離毒株gp85氨基酸序列與ALV-B的四株參考株的同源性最高，92.5％-95.1％之間，而與其他亞群的同源性在78.9-89.9％之間，與J亞群參考株的同源性更是低至36.9％-39.5％，因此將此分離毒株劃歸為B亞群。
　　 將其gag、pol基

4、因與其它各亞群參考毒株進(jìn)行比較，發(fā)現(xiàn)該分離毒株與各亞群毒株的同源性均在95％以上，實(shí)際上這兩個(gè)基因在各個(gè)亞群之間非常保守。
　　 gp37基因編碼的氨基酸序列同源性比較發(fā)現(xiàn)，雖然SDAU09C2屬于B亞群ALV，但是其gp37卻與ALV-A的MAV-1具有極高的同源性，說(shuō)明gp37的同源性與亞群沒(méi)有明確相關(guān)性。
　　 SDAU09C2的R區(qū)域與其它各亞群的同源性在80.0％-100.0％之間。U5區(qū)域與各亞群參考株相應(yīng)序

5、列同源性比較發(fā)現(xiàn)，其與外源性A、B、C、D、J亞群的同源性在90.0％以上，與E亞群的同源性在85.9％-87.5％，說(shuō)明R和U5序列與ALV的亞群沒(méi)有相關(guān)性。將SDAU09C2的U3序列與其它各亞群U3序列比較發(fā)現(xiàn)，SDAU09C2的U3序列與ALV-A參考株MQNCSU株的同源性最高，為91.1％，與ALV-B參考株RSR B和MAV-2的同源性分別為84.4％和36.1％，這說(shuō)明不同毒株之間U3序列的同源性與毒株所屬亞群同樣沒(méi)有直

6、接的相關(guān)性。
　　 通過(guò)分析調(diào)控元件發(fā)現(xiàn)，SDAU09C2的U3序列調(diào)控元件與MQNCSU沒(méi)有差異，而與B亞群RSR B株相比，SDAU09C2多出1個(gè)增強(qiáng)子序列CAAT box和1個(gè)CArG box，但缺少了一個(gè)PRE box。
　　 2.SDAU09C2株對(duì)不同品種雞的致病性比較
　　 本研究通過(guò)動(dòng)物試驗(yàn)比較了SDAU09C2株對(duì)不同品種雞的致病性。由于本實(shí)驗(yàn)室的前期試驗(yàn)中對(duì)J亞群分子化克隆毒株NX0101的

7、致病性等已進(jìn)行了深入研究，因此采用NX0101株作為對(duì)照毒株。兩個(gè)毒株在三種雞（白來(lái)航SPF雞、HN蛋雞、地方品系蘆花雞）中均采用雞胚接種的方式。動(dòng)物試驗(yàn)的比較分析結(jié)果如下：
　　 2.1兩株ALV腫瘤發(fā)生率的比較
　　 自出殼20周后，SDAU09C2毒株和NX0101毒株開(kāi)始誘發(fā)產(chǎn)生腫瘤。截止目前，兩株病毒均在SPF雞中誘發(fā)腫瘤，發(fā)生率分別為8.7％和14.3％，在HN蛋雞中只有SDAU09C2引發(fā)腫瘤，發(fā)生率為5.

8、6％，而兩株病毒均未在蘆花雞中引發(fā)腫瘤。兩株病毒均可在不同部位引發(fā)多種類(lèi)型腫瘤，SDAU09C2在目前誘發(fā)的腫瘤中多表現(xiàn)為血管瘤，另外還有卵巢和腸系膜的腫瘤，說(shuō)明該B亞群毒株具有一定的致病性；而NX0101則誘發(fā)包括血管瘤、纖維肉瘤及彌漫性腫瘤在內(nèi)的不同部位的多種類(lèi)型腫瘤。
　　 2.2兩株ALV在不同品種雞中病毒血癥檢出率的比較
　　 白來(lái)航SPF雞和HN蛋雞中，兩株病毒均在1-3周之內(nèi)即可檢測(cè)到病毒血癥，特別是白來(lái)航

9、SPF雞，在3周時(shí)9/10的雞可檢測(cè)到病毒血癥。SDAU09C2在這兩種雞中的橫向感染能力強(qiáng)于NX0101。地方品系蘆花雞中，SDAU09C2接種的雞只在5周時(shí)檢測(cè)到一過(guò)性病毒血癥，且陽(yáng)性比例不高（2/12）。橫向感染組病毒血癥檢測(cè)表明，SDAU09C2在蘆花雞中的橫向傳播能力弱于其在自來(lái)航SPF雞和HN蛋雞中的橫向傳播能力。
　　 2.3兩株ALV在不同品種雞中泄殖腔棉拭子p27檢出率的比較
　　 白來(lái)航SPF雞和HN

10、蛋雞中，在5-21周時(shí)SDAU09C2接種雞泄殖腔棉拭子p27陽(yáng)性檢出率高于NX0101接種組。SDAU09C2在這兩種雞中的橫向感染能力強(qiáng)于NX0101。地方品系蘆花雞中，在5-21周時(shí)NX0101接種組泄殖腔棉拭子p27陽(yáng)性檢出率高于SDAU09C2接種組。兩株病毒在蘆花雞中的橫向傳播能力均弱于白來(lái)航SPF雞和HN蛋雞。
　　 2.4兩株ALV在不同品種雞中對(duì)體重抑制作用的比較
　　 SDAU09C2和NX0101均

11、可對(duì)3個(gè)品種雞的增重產(chǎn)生抑制作用。在HN蛋雞中，SDAU09C2株的對(duì)體重增重的抑制作用強(qiáng)于NX0101株。但是在自來(lái)航SPF雞中，SDAU09C2的抑制作用則弱于NX0101株。在地方品系蘆花雞中，SDAU09C2對(duì)體重的抑制作用略強(qiáng)于NX0101，但兩株病毒對(duì)體重的抑制效果均弱于在另外2種雞中的抑制效果。
　　 2.5兩株ALV在不同品種雞中免疫抑制作用的比較
　　 對(duì)NDV，AIV-H5，AIV-H9滅活免疫后35

12、d的HI抗體的滴度的比較表明，SDAU09C2株可在自來(lái)航SPF雞及蘆花雞中對(duì)NDV的抗體反應(yīng)顯示一定的免疫抑制作用，而在HN蛋用型雞則沒(méi)有免疫抑制作用。該株病毒在三個(gè)品種的雞對(duì)AIV-H5和AIV-H9的抗體反應(yīng)則無(wú)影響。與SDAU09C2株不同，J亞群的NX0101株在三個(gè)品種雞對(duì)三種病毒的抗體反應(yīng)都不表現(xiàn)明顯的免疫抑制作用。
　　 出殼后6周隨機(jī)剖殺，觀察病毒對(duì)免疫器官發(fā)育的抑制作用。在白來(lái)航SPF雞中，兩株病毒均對(duì)法氏囊

13、的發(fā)育產(chǎn)生明顯的抑制作用；在蛋雞中，SDAU09C2對(duì)胸腺及法氏囊的發(fā)育均具有抑制作用，而NX0101則未對(duì)三種免疫器官的發(fā)育表現(xiàn)抑制作用；在蘆花雞中，NX0101對(duì)法氏囊的發(fā)育具有抑制作用，而SDAU09C2則未對(duì)三種免疫器官的發(fā)育產(chǎn)生影響。兩株病毒在三個(gè)品種雞中均未對(duì)脾臟的發(fā)育產(chǎn)生抑制作用。
　　 2.6兩株ALV在不同品種雞中其它檢測(cè)指標(biāo)的比較
　　 2.6.1特異性抗體的檢測(cè)
　　 兩株病毒均可在3種雞接

14、種組和橫向感染組誘導(dǎo)產(chǎn)生抗體，但是在白來(lái)航SPF雞和HN蛋雞中抗體水平和檢出率均高于蘆花雞。
　　 2.6.2對(duì)雞蛋的相關(guān)檢測(cè)
　　 目前只有蛋雞試驗(yàn)組全部開(kāi)產(chǎn)。雞蛋的檢測(cè)結(jié)果說(shuō)明，兩株病毒接種雞所產(chǎn)蛋中可在蛋清中檢測(cè)到p27抗原及卵黃抗體。SDAU09C2株兩者的檢出率均高于NX0101株。
　　 2.6.3血液常規(guī)指標(biāo)的檢測(cè)
　　 在連續(xù)的跟蹤監(jiān)測(cè)過(guò)程中，兩株病毒可使血液中白細(xì)胞和淋巴細(xì)胞數(shù)輕微變化，