兩種殼聚糖衍生物在轉(zhuǎn)基因領(lǐng)域的研究.pdf

1、殼聚糖(chitosan)是一種有著良好生物相容性、生物可降解性的天然多糖,由于其分子帶有正電性,殼聚糖作為轉(zhuǎn)基因載體的潛力令人矚目。本課題根據(jù)殼聚糖的優(yōu)良性質(zhì)合成了兩種殼聚糖衍生物,并對(duì)其進(jìn)行了理化性質(zhì)表征與轉(zhuǎn)基因效率的研究。
　　使用縮水甘油基三甲基氯化銨(GlycidylTrimethylAmmoniumChloride,GTMAC)與殼聚糖反應(yīng),合成了三種不同季銨根取代度(12.4％,28.1%,43.7%)的N-(2-羥

2、丙基三甲基)殼聚糖(N-(2-hydroxy)propyl-3-trimethylammoniumchitosanchloride,HTCC),并對(duì)HTCC進(jìn)行了1HNMR、FT-IR、X射線衍射以及熱重分析測(cè)試。HTCC比殼聚糖的結(jié)晶性能和熱穩(wěn)定性均有降低。HTCC樣品在溶液中能自發(fā)地包覆熒光素酶質(zhì)粒(pGL3)形成微球。細(xì)胞毒性實(shí)驗(yàn)的結(jié)果顯示三種HTCC樣品的細(xì)胞毒性均遠(yuǎn)小于聚乙烯亞胺。在以Hela細(xì)胞為對(duì)象的體外轉(zhuǎn)基因?qū)嶒?yàn)中,HT

3、CC樣品表現(xiàn)出比殼聚糖更高的轉(zhuǎn)基因效率。HTCC的這些特點(diǎn)顯示其發(fā)展成為一種新型安全高效的非病毒轉(zhuǎn)基因載體的潛質(zhì)。
　　以殼聚糖、乳糖酸、GTMAC為原料,先后將乳糖酸和GTMAC通過共價(jià)鍵結(jié)合到殼聚糖的自由氨基上,得到半乳糖基化度13.7%,季銨根取代度30.8%的雙功能修飾的肝靶向殼聚糖衍生物(gal-HTCC),繼而對(duì)其進(jìn)行了1HNMR、FT-IR、元素分析、X射線衍射的測(cè)試。與殼聚糖相比,gal-HTCC的水溶性大為增加。