人牙囊細胞克隆分選及其分化功能的相關(guān)研究.pdf

1、牙周病治療的目標是促使受損組織不同程度的修復(fù)和再生，如何獲得牙周組織結(jié)構(gòu)和功能的完全性再生，一直是國內(nèi)外學(xué)者追求的目標和研究的方向。近年來，牙周組織再生的研究取得了重要進展。理想的牙周組織再生，應(yīng)同時包括牙骨質(zhì)、牙周膜和牙槽骨的再生。其關(guān)鍵是選擇合適的干細胞作為牙周組織工程的種子細胞。
　　牙囊起源于外胚間充質(zhì)，是包繞在成釉器周圍的疏松結(jié)締組織，在牙齒發(fā)育后期和牙齒的萌出中均發(fā)揮著重要作用，是形成牙周組織的唯一器官。牙囊細胞在牙周

2、組織分化發(fā)育中的特點，使其成為一種值得考慮的種子細胞。牙囊細胞是牙周組織發(fā)育的直接前體細胞，成纖維細胞、成牙骨質(zhì)細胞以及成骨細胞都由其分化而來，在牙齒發(fā)育后期形成牙周膜、牙骨質(zhì)及固有牙槽骨。牙囊細胞具有形成牙周組織各部分的能力，能夠在短時間內(nèi)向多個方向分化，這可能與牙囊細胞自身生物學(xué)特性有關(guān)。牙囊細胞為一類異質(zhì)性細胞群，可能含有牙周發(fā)育的前體細胞成分，具有向特定方向分化的能力。此外，牙囊細胞在臨床上取材方便，可以從丟棄的牙囊組織中獲得。

3、以上均提示牙囊細胞可以作為候選種子細胞應(yīng)用于牙周組織工程。因此，本研究從牙囊細胞的生物學(xué)特性及分化特點等方面著手進行研究，通過篩選單細胞衍生的牙囊細胞克隆并對其進行克隆表型分析，更深入地認識這種存在于牙周發(fā)育時期的前體細胞，探討其作為種子細胞應(yīng)用于牙周組織工程的可行性，指導(dǎo)以牙囊細胞為種子細胞的牙周組織再生工程的構(gòu)建，為今后的實驗研究以及臨床應(yīng)用奠定基礎(chǔ)。
　　課題研究的主要內(nèi)容和結(jié)果如下：
　　第一部分：牙囊干細胞的分離和

4、生物學(xué)特性研究
　　目的：驗證牙囊干細胞作為牙周組織工程種子細胞的可行性。方法：本實驗分離培養(yǎng)了人牙囊干細胞，行體外生物學(xué)特性檢測，并以人骨髓間充質(zhì)干細胞為對照，進行干細胞生物學(xué)相關(guān)性狀比較。結(jié)果：兩種細胞均為成纖維細胞樣細胞群，牙囊細胞胞體稍短，骨髓間充質(zhì)干細胞胞體則較為細長；兩種細胞的CD34、CD45（造血系細胞標志）表達均呈陰性；CD29、CD44、CD90、CD105（間充質(zhì)細胞標志）均呈高表達；相對于骨髓間充質(zhì)干細胞，

5、牙囊干細胞的Stro-1（間充質(zhì)干細胞特異性標志物，在未分化細胞群中高表達）表達、增值活性及克隆形成率均較高；成骨向分化能力沒有顯著性差異；成脂向分化能力較低。結(jié)論：牙囊干細胞同骨髓間充質(zhì)干細胞一樣，在體外均呈現(xiàn)較強的干細胞特性-增殖活性、克隆形成能力、多向分化能力；兩者均來自外胚間充質(zhì)細胞；相對于骨髓間充質(zhì)干細胞，牙囊干細胞中含有更多的未分化細胞。牙囊干細胞可以作為優(yōu)選種子細胞應(yīng)用于牙周再生組織工程。
　　第二部分：牙囊細胞異質(zhì)

6、性研究
　　目的：研究牙囊細胞異質(zhì)性。方法：采用有限稀釋鋪板法篩選單細胞衍生的牙囊細胞克隆，通過克隆表型分析，觀察不同克隆表型牙囊細胞的生物學(xué)特性及其牙周組織再生能力。結(jié)果：通過有限稀釋方法可以獲得單細胞衍生的牙囊細胞克?。徊煌寺”硇椭g的生物學(xué)特性存在較大差異；根據(jù)各個克隆的表型分析大致可以分為未分化型、成纖維型和成骨/牙骨質(zhì)型三種表型，并相應(yīng)在體內(nèi)異位形成特有的結(jié)構(gòu)。結(jié)論：牙囊細胞為異質(zhì)性細胞群，不同表型的牙囊細胞克隆具有形